论文摘要
目的:将标记荧光的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells ,MSCs静脉移植到脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）大鼠模型体内,观察MSCs在损伤区的存活及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）表达和血管新生情况,为MSCs移植治疗SCI及其机理提供实验依据。方法:1.体外分离培养MSCs,流式细胞仪检测其表面标志。2.实验动物分组:成年健康SD雄鼠42只（体重200g-250g）,随机平均分成7组,每组6只,即3组为MSCs移植组;3组为对照组;1组为正常组3.脊髓损伤模型的制备:用自制改良的Allen装置撞击脊髓T12节段,建立脊髓外伤性截瘫模型。4.羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（ carboxyfluorescein succinimidyl ester,CFSE）体外标记MSCs5. MSCs移植MSCs移植组6只:术后3天经尾静脉注射MSCs对照组6只:注射等量磷酸缓冲盐溶液（phosphate-buffered saline,PBS）6.取材和检测6.1心脏灌注、取材、切片6.2激光共聚焦显微镜观察CFSE标记的MSCs在体内存活情况及分泌生长因子VEGF和bFGF的情况。6.3逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction ,RT-PCR）法检测VEGF和bFGFmRNA表达变化情况。6.4免疫组化检测第VIII因子相关抗原表达情况6.5采用Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分和爬网格训练评估大鼠行为学改变。7.统计学分析结果: 1.激光共聚焦显微镜显示脊髓损伤后经尾静脉移植的MSCs可达到脊髓损伤处聚集、存活且可以分泌生长因子VEGF和bFGF。2.RT-PCR结果显示VEGF和bFGFmRNA表达在损伤后比正常增高;移植后1天,MSCs移植组与对照组相比（P>0.05）,无统计学意义;移植后3天和14天,MSCs移植组均高于同一时间段的对照组且随时间延长表达持续升高。3.第VIII因子相关抗原免疫组化结果显示:移植后1天,MSCs移植组与对照组相比（P>0.05）,无统计学意义;移植后3天和14天,MSCs移植组微血管密度（microvessel density,MVD）均高于同一时间段的对照组且随时间延长表达持续增多。4.BBB评分和爬网格训练显示移植MSCs可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复。结论:静脉移植MSCs能在大鼠脊髓损伤区存活且分泌生长因子VEGF和bFGF,从而促进血管新生。
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