RNAi抑制MeCP2对肺癌A549细胞RASSF1A和C/EBPα表达及增殖的影响

论文摘要

目的:探讨RNA干扰下调MeCP2基因后对人肺癌A549细胞RASSF1A和C/EBPα基因表达及对细胞增殖能力的影响。方法:根据MeCP2的mRNA碱基序列设计并合成短发夹RNA（shRNA）,构建质粒表达载体,用阳离子脂质体法体外转染A549细胞,筛选出稳定转染的细胞株,RT-PCR法检测MeCP2抑制效果及RASSF1A和C/EBPα表达的变化,MTT法检测转染后细胞增殖能力的变化。结果:成功构建了靶向MeCP2的真核表达载体pSilencer- MeCP2/Ⅰ和pSilencer- MeCP2/Ⅱ,与空白组相比,pSilencer- MeCP2/Ⅰ和pSilencer- MeCP2/Ⅱ组均可有效抑制MeCP2基因mRNA的表达,抑制率分别为53.8﹪和58.5﹪,C/EBPα表达分别上调约115﹪和135﹪,且pSilencer- MeCP2/Ⅰ和pSilencer- MeCP2/Ⅱ组细胞增殖能力明显减弱（P<0.05）,而RASSF1A的表达在各组细胞中未见明显变化（P>0.05）。结论:肺癌A549细胞中MeCP2基因的表达可被RNA干扰载体有效抑制,进而导致细胞中与增殖和凋亡相关基因C/EBPα的表达上升,细胞增殖能力减弱。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 第二章 人MeCP2基因ShRNA真核表达载体的构建和鉴定
• 2.1 主要试剂与仪器设备
• 2.2 技术路线
• 2.3 方法
• 2.4 实验结果
• 2.5 讨论
• 2.6 结论
• 第三章 RNAi抑制MeCP2对肺癌A549细胞RASSF1A和C
• 3.1 主要试剂与仪器设备
• 3.2 技术路线
• 3.3 方法
• 3.4 统计学处理
• 3.5 实验结果
• 3.6 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 实验相关图片
• 综述
• 甲基化 CpG 结合蛋白在肿瘤中的研究进展
• 参考文献
• 攻读学位期间研究成果