论文题目: 转化生长因子β1调节培养的人视网膜色素上皮细胞MMPs和TIMP-1的表达及意义
论文类型: 博士论文
论文专业: 眼科学
作者: 曾爱萍
导师: 曾水清
关键词: 视网膜色素上皮细胞,基质金属蛋白酶,基质金属蛋白酶组织抑制剂,转化生长因子,细胞迁移
文献来源: 华中科技大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的对培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelial,hRPE)细胞中几种MMPs(matrix metalloproteinases)和TIMP-1(tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1)的表达活性进行研究,探讨转化生长因子β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)对MMPs和TIMP-1的调节作用,评价TGF-β1所介导的MMPs活性改变在人RPE细胞迁移中所起的作用,为防治增生性玻璃体视网膜病变(Proliferative vitreoretinopathy,PVR)寻找一种新的基因治疗途径。方法1)3-6代培养的hRPE细胞,采用半定量RT-PCR检测hRPE细胞中MMP-2,-9和TIMP-1的表达,及不同浓度的TGF-β1(0.01,0.1,1,10 ng/ml)对hRPE细胞表达MMP-2,-9和TIMP-1的影响。2)经不同浓度的TGF-β1(0.01,0.1,1,10ng/ml)处理,36h后收集条件培养基,或经TGF-β1作用不同时间(24,36,48h)后,收集条件培养基,采用明胶酶谱分析方法定量检测hRPE细胞上清液中MMP-2和MMP-9的活性水平。3)设计渗透房测定,培养的人RPE细胞经10ng/mlTGF-β1作用36h后,在有或无MMP抑制剂--Doxycycline的Boyden小室中,hRPE细胞经双面涂有matrigel胶的硝酸纤维素膜迁移。结果1)抗角蛋白免疫组织化学染色几乎所有的RPE细胞呈阳性着色,培养的人RPE细胞中MMP-2,-9和TIMP-1的mRNA均有表达。TGF-β1能上调MMP-2 mRNA的表达,并呈剂量依赖性。低浓度(0.01、0.1 ng/ml)TGF-β1处理RPE细胞后,可下调TIMP-1 mRNA的表达,随着TGF-β1浓度的增加(1、10ng/ml),TIMP-1mRNA的表达可轻微上调,但与对照组相比没有显著性差异。2)培养的hRPE细胞上清液中可检测到MMP-2,经TGF-β1处理后,能显著上调培养基中MMP-2的分泌。TGF-β1的浓度从0.01-10ng/ml,MMP-2的分泌活性有明显的剂量依赖性,同时MMP-2的分泌活性随TGF-β1作用时间延长而增强。3)在无Doxycycline的环境下,TGF-β1刺激人RPE细胞后,能明显促进RPE细胞迁移,迁移的RPE细胞数增加约27%。TGF-β1刺激人RPE细胞迁移,在Doxycycline的环境中受到明显抑制,随着Doxycycline浓度的增加,RPE细胞穿过微小多孔膜发生迁移的细胞数相应减少,迁移的RPE细胞数减少约50～70%,并有明显剂量依赖性。结论1)培养的人视网膜色素上皮细胞能表达MMP-2、MMP-9及TIMP-1。2)TGF-β1能调节MMP-2,MMP-9的表达,导致RPE细胞大量释放MMP-2。3)TGF-β1不能诱导TIMP-1的表达成比例增加,导致MMP-TIMP平衡的直接改变。4)MMP分泌活性和表达的改变,有利于RPE细胞的迁移。5)TGF-p1介导的细胞间信号通路,尤其是MMP抑制剂的应用为PVR的基因治疗提供了一种新的治疗模式。
论文目录:
中文摘要
Abstract
第一部分 转化生长因子β_1对培养的人视网膜色素上皮细胞表达MMP和TIMP-1 mRNA的影响
1 材料
2 方法
3 结果
4 讨论
参考文献
附图
第二部分 转化生长因子β_1调节培养的人视网膜色素上皮细胞分泌MMP-2和MMP-9
1 材料
2 方法
3 结果
4 讨论
参考文献
附图
第三部分 转化生长因子β_1刺激人RPE细胞迁移与MMP释放之间的关系
1 材料
2 方法
3 结果
4 讨论
参考文献
附图
综述 基质金属蛋白酶与增殖性玻璃体视网膜疾病
致谢
发布时间: 2007-07-13
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