论文摘要
论文一血管生成在肝细胞肝癌发生及发展中的作用研究肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是全球最常见的恶性肿瘤之一,死亡率在恶性肿瘤中居第三位。HCC的发病率在亚洲和非洲最高,在美国和西欧等发达国家也呈逐年上升趋势。HCC血供非常丰富,血管生成对肿瘤的生长、侵袭和转移都有决定性的作用,而且在发病早期就有血管侵犯和肝内转移的倾向,故预后较差。HCC的发生是一个在复杂的遗传背景下由多个因素参与的过程,对HCC发生发展的分子机制进行深入细致的研究极为重要。在肿瘤血管生成过程中,内皮细胞的基因改变和生物学行为的变化开始引起人们的重视。本研究拟应用人类全基因组芯片技术,比较HCC组织相对正常肝组织基因表达谱的改变,寻找在HCC发生发展中的差异表达基因,为HCC的研究和临床治疗提供新的靶点。在差异表达的基因谱中挑选有重要意义的基因,进行体内外实验研究以探索这些差异表达基因在HCC中的作用:一方面我们对HCC患者肿瘤组织进行研究,验证差异表达基因的表达水平;另一方面对HCC血管内皮细胞进行分离、纯化和鉴定,探讨血管内皮细胞在HCC血管生成和发生发展中的作用。方法:1.收集2例HCC患者的癌组织和2例正常对照肝组织,经HE染色确定相应组织的病理类型后,用Trizol一步法抽提组织的总RNA,对提取和纯化的RNA进行1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳做质量检测,并进行反转录、荧光标记和纯化。然后将肝癌组织与正常对照肝组织的RNA进行杂交、洗涤,用LuxScan 10KA扫描仪获取图像。根据芯片杂交的最终数据,按照荧光密度比值≥2.0或者≤0.5筛选出差异表达基因。2.收集42例HCC患者的癌组织和癌旁组织,其中男性34例,女性8例,平均年龄59.4岁（32～74岁）,组织标本均经过病理学诊断证实。用免疫组化染色检测CD31标记的微血管密度,用荧光实时定量PCR法、Western blot和免疫组化方法检测差异表达基因在HCC和对照肝组织中mRNA和蛋白水平的表达及组织学定位。3.收集病理学证实的新鲜肝癌组织和癌旁组织,用CD31单克隆抗体标记的免疫磁珠分离、纯化组织中的血管内皮细胞,并对获得的内皮细胞进行培养和鉴定,用荧光实时定量PCR和Western blot检测差异表达基因在内皮细胞中mRNA和蛋白水平的表达。结果:1.HE染色结果显示HCC癌组织及正常对照肝组织呈典型的组织病理学改变;1%琼脂糖凝胶电泳结果显示抽提的组织总RNA的质量高,无降解现象。芯片扫描结果发现2张芯片中共同差异表达基因855个,其中上调的基因为457个,下调的基因为398个。Cluster聚类分析表明HCC的发生发展过程相当复杂,其中涉及癌基因与抑癌基因、编码细胞周期相关蛋白的基因、与细胞应激相关的基因、细胞骨架和运动相关的基因、细胞凋亡相关的基因、调节DNA合成、修复和重排相关的基因、细胞因子受体相关基因、免疫蛋白相关基因、细胞代谢相关基因、信号转导相关基因、调节转录的基因、与生长发育相关的基因等多个通路的多条基因,尚有部分基因不能分类。2.PRL-3在HCC组织中表达明显升高,同癌旁组织相比差异有显著统计学意义。免疫组化染色显示,PRL-3主要定位于细胞浆。与患者临床资料进行相关分析显示,HCC组织中PRL-3的mRNA水平与血清AFP水平、肿瘤血管侵袭和肿瘤转移状况呈正相关。PRL-3与CD31染色标记的微血管密度（MVD）呈正相关（r=0.583,P＜0.001）通过检测MMP-2、MMP-9和E-cadherin在HCC组织中mRNA和蛋白水平的表达发现,PRL-3与MMP-2（r=0.695,P＜0.001）、MMP-9（r=0.554,P＜0.001）表达呈正相关,和E-cadherin（r=-0.731,P＜0.001）表达呈负相关。3.用免疫磁珠分选获得血管内皮细胞的纯度在90%以上。从HCC组织中分离的血管内皮细胞呈现典型的内皮细胞的形态特征,免疫细胞化学和荧光染色证实此内皮细胞高表达vWF,在半定量RT-PCR检测中该细胞表达CD31,CD146,而不表达AFP及CD45。在HCC血管内皮细胞中PRL-3、MMP-2、MMP-9在mRNA水平和蛋白水平的表达均明显升高。结论:1.本研究利用人类全基因组芯片技术对HCC肿瘤组织与正常对照肝组织进行了差异表达基因的筛选和综合分析,发现了在HCC发生发展中的多个差异表达基因,其中许多基因对HCC的分子机制研究有较大的价值。2.在组织学水平的检测中,PRL-3与MMP-2、MMP-9显著高表达,E-cadherin表达显著降低,并且PRL-3与MVD、MMP-2、MMP-9及E-cadherin等肿瘤血管生成和侵袭相关基因的表达密切相关,说明PRL-3是HCC侵袭和血管生成过程中一个非常重要的基因。3.采用免疫磁分选法有效地分离纯化了HCC组织和癌旁肝组织中的血管内皮细胞,分离的内皮细胞可用于HCC血管生成的相关研究。PRL-3和MMP-2、MMP-9在HCC血管内皮细胞中高表达,提示其在HCC的血管生成和侵袭中可能起重要作用,有望成为新的抗肿瘤血管生成研究和治疗的靶点。论文二CD4+CD25+调节性T细胞在真性红细胞增多症中的研究目的:本研究探讨真性红细胞增多症（Polycythemia vera,PV）患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞（Regulatory T cells,Treg）的变化以及在本病中可能的作用机制。方法:收集21例PV患者和25例正常对照的外周抗凝血,应用流式细胞仪分析外周血单个核细胞中CD4+CD25+Treg细胞的比例。利用磁性细胞分选（magnetic cell sorting,MACS）技术分离CD4+CD25+Treg细胞。用实时定量PCR和Western blot检测CD4+CD25+Treg细胞中FOXP3在mRNA和蛋白水平的表达。将从PV患者中分离的CD4+CD25+Treg细胞与CD4+CD25-T细胞共同培养,检测其免疫抑制功能的变化。结果:利用MACS免疫磁珠法分离的细胞纯度较高,均在90%以上。流式细胞学分析结果显示,PV患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞比例为10.93±4.02%,高于正常对照组5.86±1.99%（P＜0.05）;且CD4+CD25+Treg细胞中FOXP3在mRNA和蛋白水平的表达量高于正常对照组（P＜0.05）。体外免疫抑制功能试验表明,PV患者CD4+CD25+Treg细胞对激活的CD4+CD25-细胞的抑制作用明显增强。结论:PV患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞在CD4+T细胞中比例增高且抑制活性增强;CD4+CD25+Treg细胞可能导致了PV中T细胞免疫的异常,从而在该病的发病机制中起一定的作用。
论文目录
相关论文文献
- [1].肝细胞肝癌放疗联合免疫治疗研究进展[J]. 肝癌电子杂志 2019(04)
- [2].影像学术前预测肝细胞肝癌微血管侵犯研究进展[J]. 中国医学影像技术 2020(05)
- [3].TACE联合索拉非尼治疗中晚期肝细胞肝癌的护理[J]. 中国农村卫生 2020(12)
- [4].编者按[J]. 肝癌电子杂志 2019(01)
- [5].肝细胞肝癌患者血浆中甘露聚糖结合凝集素和甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2的表达水平[J]. 南方医科大学学报 2017(12)
- [6].索拉非尼对中晚期肝细胞肝癌患者近期生活质量影响[J]. 中西医结合护理(中英文) 2016(12)
- [7].经皮微波消融治疗早期肝细胞肝癌患者38例的远期疗效观察[J]. 齐齐哈尔医学院学报 2015(02)
- [8].微小核糖核酸-375与肝细胞肝癌关系的研究进展[J]. 中华老年多器官疾病杂志 2019(12)
- [9].肝细胞肝癌靶向与免疫治疗的现状与进展[J]. 现代医学 2019(09)
- [10].手术切除治疗中央型肝细胞肝癌临床分析[J]. 系统医学 2017(03)
- [11].肝细胞肝癌:最优化的分期影响生存率[J]. 肝脏 2016(08)
- [12].经导管肝动脉化疗栓塞联合索拉非尼治疗不能手术切除肝细胞肝癌的疗效[J]. 中国肿瘤临床与康复 2015(10)
- [13].索拉非尼治疗肝细胞肝癌不良反应的护理[J]. 实用临床医药杂志 2013(04)
- [14].分化抑制因子-1在肝细胞肝癌中的表达及与预后相关性的初步研究[J]. 华西医学 2013(06)
- [15].肝细胞肝癌外科治疗方法的选择[J]. 中华普通外科学文献(电子版) 2010(01)
- [16].肝细胞肝癌基因治疗研究进展[J]. 现代医药卫生 2010(13)
- [17].中晚期肝细胞肝癌的靶向治疗动态[J]. 中华肿瘤防治杂志 2010(15)
- [18].肝细胞肝癌中微血管密度及MMP-2和MMP-9的表达与术后转移及预后的关系[J]. 中国肿瘤临床 2010(07)
- [19].肝细胞肝癌外科治疗方法的选择[J]. 中华普通外科学文献(电子版) 2009(02)
- [20].肝细胞肝癌相关蛋白质组学研究进展[J]. 医学综述 2009(24)
- [21].肝细胞肝癌外科治疗方法的选择[J]. 中华普通外科学文献(电子版) 2008(06)
- [22].术前格拉斯哥预后评分对肝细胞肝癌患者的临床预后分析[J]. 全科医学临床与教育 2019(09)
- [23].TACE联合阿帕替尼治疗肝细胞肝癌伴门静脉癌栓疗效研究[J]. 生物医学工程与临床 2019(06)
- [24].中晚期肝细胞肝癌的靶向治疗:困境与希望[J]. 中国普通外科杂志 2017(01)
- [25].功能磁共振成像评价肝细胞肝癌疗效的研究进展[J]. 功能与分子医学影像学(电子版) 2015(01)
- [26].分子靶向药物在肝细胞肝癌治疗中的研究进展[J]. 现代肿瘤医学 2014(08)
- [27].儿童肝细胞肝癌的临床特点及预后分析[J]. 现代肿瘤医学 2012(12)
- [28].肝细胞肝癌组织中Bcl-2核表达及MMP-2和MMP-9表达与术后复发转移及预后的关系[J]. 中国肿瘤临床 2012(11)
- [29].肝细胞肝癌少见CT征像误诊1例分析[J]. 中国社区医师(医学专业) 2010(32)
- [30].环氧化酶-2在肝细胞肝癌中的表达及与多药耐药的相关性研究[J]. 实用肿瘤杂志 2009(05)
标签：肝细胞肝癌论文; 基因芯片论文; 血管生成论文; 内皮细胞论文; 真性红细胞增多症论文; 调节性细胞论文; 发病机制论文;