论文摘要
乙肝病毒（HBV）是一种DNA病毒,人感染乙肝病毒可引起急、慢性乙型肝炎。据统计,至今全世界大约有20亿人感染过乙肝病毒（HBV）,其中3.5亿～4亿人为HBV慢性病毒携带者,全球每年由于肝硬化、肝功能衰竭和肝癌而死亡的人数达50～120万。当前,虽然可以获得安全有效的乙肝疫苗,但是全世界乙肝蔓延的趋势并没有下降,慢性乙肝给世界带来了沉重的经济和社会负担。当今,只有少数药物被美国FDA批准用于临床治疗慢性乙肝。例如:干扰素,拉米夫定,阿德福韦酯等。大多数国家仍将干扰素作为抗乙肝病毒药物用于临床,但是其低的有效率（30-40%）和昂贵的治疗费用及副作用限制了其应用。而拉米夫定存在着响应率低及耐药性的问题,限制了它的疗效。阿德福韦酯（Adefovir dipivoxil, Fig. 1）是阿德福韦（PMEA）的一种酯类前体药物,在体内和体外均有强的抗HBV活性。特别是阿德福韦酯能有效的抑制对拉米夫定、泛昔络韦耐药的HBV变异病毒株的复制。然而,阿德福韦酯在药代动力学实验中表现不佳,因为阿德福韦（PMEA）在吸收后首先在肾脏聚集累积,从而限制了阿德福韦在肝脏的吸收。而且PMEA在肾脏的高吸收水平,可以导致肾毒性。这在核苷磷酸酯类似物中已有体现。剂量依赖的肾毒性（在高剂量下产生肾毒性）、以及体内代谢可能释放有细胞毒性的甲醛和2-嘌呤基乙酸,已成为其临床应用最大的局限性[3,4]。阿德福韦酯的母体药物阿德福韦,无论在用于动物还是人,其口服生物利用度都不佳[5-7]。可能原因是阿德福韦的磷酸根在生理pH值下电离产生负电荷[8],而使阿德福韦在小肠粘膜细胞上渗透性很差,限制了其吸收。为了增加阿德福韦（PMEA）的细胞吸收,提高抗病毒活性,减少细胞毒性,人们开发出了一些前体药物,例如: bis（SATE）-PMEA[9], cyclo Sal-PMEA[10]和靶向前药瑞莫福韦（remofovir, Fig. 1）[11]。这些新的药物改善了PMEA药效学和药物代谢动力学数据,但也存在着明显的缺点。例如,不稳定性和细胞毒性[10,11]。因此,需要我们利用更有效的前药策略,开发新的高效低毒的抗HBV药物。本论文运用新颖的前药策略,设计合成新的活性强,而毒性低的阿德福韦（PMEA）酯类前体药物。目的:依据前药设计原理,运用新颖的前药策略,设计合成阿德福韦新的前体药物。氨基酸在小肠粘膜细胞吸收为主动转运机制已经在核苷-L-氨基酸酯类前药的设计中被证实,核苷的L-氨基酸酯类前体药物能极大的提高口服生物利用度和母体药物（PMEA）的抗病毒活性。而且由于L-氨基酸是存在于人体的内源性物质,所以核苷-L-氨基酸酯类前药在体内代谢产生的L-氨基酸,不会产生细胞毒性。胆固醇同为体内内源性物质,且胆固醇特殊的溶解性特征（脂溶性很强）,可以极大的改善前药的脂溶性。苄基脂溶性较好,而且基团较小,反应活性较高,用其作为修饰基团易于反应制得相应的前药。因此,本课题设计、合成一系列由阿德福韦与氨基酸、胆固醇和苄醇等生成的酯类前药。包括:1.双（L-苏氨酸甲酯）阿德福韦酯2.双（L-丝氨酸甲酯）阿德福韦酯3.双（L-羟脯氨酸甲酯）阿德福韦酯4.双（N-苄氧羰基-L-羟脯氨酰甲酯氧基羰基氧基甲基）阿德福韦酯5.双（胆固醇-3-氧基羰基氧基甲基）阿德福韦酯6.阿德福韦双苄酯7.N6-苄基-阿德福韦单苄酯8.N6-苄基-阿德福韦双苄酯。方法:阿德福韦（9（-2-膦酰甲氧基乙基）腺嘌呤,PMEA）,是一种活性强的广谱的抗病毒核苷类似物。本研究以阿德福韦为母体化合物,将阿德福韦嘌呤环9位侧链磷酸上的两个羟基分别与氨基酸、胆固醇和苄醇成酯,得到了6个阿德福韦的酯类化合物（1～6）。同时对其6位氨基用苄基修饰,得到化合物7和8。结果:根据设计的合成路线,得到了8个阿德福韦酯类前体药物。化合物1. ESI-MS: Calcd for C18H30N7O8P: 503.5. Found: 504.5, （M+1）+; 526.6（M+Na）+.化合物2. ESI-MS: Calcd for C16H26N7O8P: 475.4. Found: 476.6 （M+1）+; 498.8, （M+Na）+.化合物3. ESI-MS: Calcd for C20H30N7O8P: 527.5. Found: 528.6, （M+1）+; 550.6（M+Na）+.化合物4. ESI-MS: Calcd for C40H46N7O18P: 943.8. Found:945.0（M+1）+; 978.6（M+Na）+.化合物5. 1H-NMR（400 MHz, DMSO-d6 ,δ）: 8.33（1H, s）, 7.97（1H, s）, 5.65（4H, d）, 5.39（2H, s）, 4.51（2H, m）, 4.40（2H, t）, 3.95（2H, t）, 3.88（2H, d）, 2.96（1H, s）, 2.88（1H, s）, 2.39（4H, m）, 2.02-0.67（83H, m）.ESI-MS: Calcd for C66H104N5O10P: 1158.5. Found: 1158.9, （M+1）+.化合物6. ESI-MS: Calcd for C22H24N5O4P: 453.4. Found: 453.2,M+; 453.8（M+1）+; 476.2（M+Na）+; 907.3（2M+1）+; 929.4 （2M+Na）+.化合物7. 1H-NMR（400 MHz, DMSO-d6 ,δ）: 9.65（2H, br.s）, 8.79（1H, s）, 8.69（1H, s）, 7.34-7.24（10H, m）, 5.58（2H, s）, 4.68（2H, d）, 4.39（2H, t）, 3.88（2H, t）, 3.46（2H, d）.ESI-MS: Calcdfor C22H24N5O4P: 453.4. Found: 453.2, M+; 454.6（M+1）+; 475.8（M+Na）+.化合物8. ESI-MS: Calcd for C29H30N5O4P: 543.2. Found: 543.5（M+1）+; 566.1（M+Na）+.结论:成功合成了目标化合物1～8,为阿德福韦酯类前药的活性研究和药代动力学研究奠定了基础。