论文摘要
胰岛素样生长因子-I（human Insulin-like Growth Factor-I,hIGF-I）是一类具有细胞分化和增殖功能,并具有胰岛素样作用的多肽。它应用的范围越来越广,但是hIGF-I供应的相对不足成了应用的的主要障碍之一。家蚕丝腺是一个高度分化的组织,具有非常强的蛋白合成及分泌能力,因此在生产基因药物方面丝腺反应器有着很好的应用前景。为了实现转基因家蚕丝腺生物反应器实现hIGF-I的分泌表达,提高重组蛋白表达水平,简化提取工艺,用家蚕丝胶（ser-1）启动子控制丝素重链基因fib-H信号肽和hIGF-I融合基因构建基于piggyBac转座子的转基因载体pigA3GFP-serHS-hIGF-I-neo,通过精子介导法导入家蚕,对筛选获得转基因家蚕进行hIGF-I的表达水平检测。通过piggyBac转座子介导成功将fib-H信号肽和hIGF-I融合基因表达盒整合进入家蚕基因组,并实现表达目的蛋白部分分泌进入丝腺腔并最终到达蚕丝丝胶层。在转基因家蚕G1代每克新鲜中部丝腺组织中hIGF-I的表达水平约为43.8 ng左右,每克蚕茧中hIGF-I的含量大约为46.7 ng左右。结果表明丝素重链基因fib-H信号肽在中部丝腺组织可引导重组蛋白的分泌表达,提高表达水平。此外,用家蚕丝素Fhx/P25启动子驱动hIGF-I,构建了转基因载体pigA3GFP- Fhx/P25-hIGF-ie-neo,该载体以精子介导法导入蚕卵,通过筛选并结合分子生物学鉴定,获得了转基因家蚕。通过绿色荧光观察结合采用10 mg/ml的G418筛选,PCR和点杂交鉴定,将IGF-I转基因家蚕系多代培养,选取G8代家蚕幼虫解剖,取其后部丝腺制作冻干粉。ELISA检测结果显示G8代hIGF-I在每克后部丝腺组织冻干粉中的表达水平为493 ng左右。通过尾部静脉注射链脲霉素（STZ）建立糖尿病（DM）小鼠模型,用后部丝腺冻干粉对其灌胃,结果DM小鼠血糖明显下降（P<0.05）。表明转基因家蚕丝腺表达hIGF-I具有生物学活性。
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相关论文文献
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- [3].腺病毒介导的hIGF-Ⅰ基因转染对构建组织工程软骨的影响[J]. 江苏医药 2009(01)
- [4].转基因家蚕丝腺组织和转化家蚕培养细胞表达hIGF-Ⅰ[J]. 中国科学(C辑:生命科学) 2009(07)