C-藻蓝蛋白及其亚基的分离纯化和体外抗肿瘤研究

论文题目: C-藻蓝蛋白及其亚基的分离纯化和体外抗肿瘤研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 生理学

作者: 章申峰

导师: 龚兴国

关键词: 藻蓝蛋白,分离纯化,细胞毒性分析,细胞凋亡

文献来源: 浙江大学

发表年度: 2005

论文摘要: 藻蓝蛋白（phycocyanin PC）是藻胆蛋白的重要组分,主要存在于蓝藻、红藻、隐藻和少数一些甲藻中,是这些藻类进行光合作用的捕光色素之一。根据来源不同,一般分为C-藻蓝蛋白（C-PC）和R-藻蓝蛋白（R-PC）两种。藻蓝蛋白由α和β亚基组成,在天然条件下,大多数以（αβ）3或（αβ）6等杂聚体形式存在。研究表明,藻蓝蛋白具有众多医疗保健功能,比如抗炎症、抗氧化、清除自由基等,并具有一定的抗肿瘤功效。本文从钝顶螺旋藻中大量提取C-PC,研究了C-PC在体外对肺腺癌SPC-A1细胞的杀伤作用,初步探讨了C-PC的体外抗肿瘤作用机制;首次从C-PC中分离纯化到了具有完整荧光活性的α和β亚基,并对分子量更小,更适于成为药物的两个亚基进行了体外抗肿瘤试验。为C-PC及其α、β亚基能否成为新一代抗肿瘤药物建定了一定的理论基础。本实验以新鲜钝顶螺旋藻为实验材料,建立起一套高效,简便的藻蓝蛋白分离纯化工艺,得到了最高纯度在4.5以上的藻蓝蛋白纯品,通过反复摸索和试验,运用CM-sepharose离子交换层析法从制备的新鲜藻蓝蛋白纯品中分离得到α和β亚基,并成功对两个亚基进行复性。经SDS-PAGE电泳、紫外/可见分光光度计及荧光分光光度计检测鉴定,分离得到的α和β亚基具有特异的光谱学性质和荧光活性,跟有关文献报道一致。 C-PC、α和β亚基的体外细胞毒性分析显示,三者对SPC—A1细胞的生长均有一定的抑制作用。在相同摩尔浓度下,β亚基具有对SPC-A1细胞最强的杀伤功效,并有良好的时间和剂量关系,提示其具有成为抗肿瘤药物的良好潜力。研究还显示,较高浓度（≥40μM）的C-PC也可在体外显著抑制肺腺癌SPC-A1细胞的生长,并具良好的时间剂量关系。细胞核Hochest染色和DNA片断化检测表明,诱导细胞凋亡是C-PC杀伤肺腺癌SPC-A1细胞的主要途径,可能是C-PC体外抗肿瘤的主要作用机理。

论文目录:

摘要

ABSTRACT

第一部分文献综述

一、藻蓝蛋白的结构、性质及功能研究进展

引言

1 藻蓝蛋白的组成结构

2 藻蓝蛋白的色基与其光谱学性质

3 藻蓝蛋白在光合作用中的能量传递机制

4 藻蓝蛋白的稳定性研究

5 藻蓝蛋白的各种生理学功能

5．1 藻蓝蛋白可提高机体的抗辐射能力

5．2 藻蓝蛋白具有抗氧化、抗炎症的功效

5．3 藻蓝蛋白可保护神经组织免受损伤

5．4 藻蓝蛋白可保护 DNA免受氧化损伤

5．5 藻蓝蛋白促进机体免疫系功能和抑制溶血

6 藻蓝蛋白的抗肿瘤功能和分子机理研究

6．1 体内体外抗肿瘤效应

6．2 藻蓝蛋白可以诱导肿瘤细胞的凋亡

6．3 藻蓝蛋白——一种有效的COX-2抑制剂

7 藻蓝蛋白在光动力疗法中的应用潜力

7．1 肿瘤光动力疗法概述

7．2 藻蓝蛋白具有成为新一代光敏剂的潜力

参考文献 (REFERENCES)

第二部分实验论文

二、C-藻蓝蛋白及其亚基的分离纯化和体外抗肿瘤研究

引言

1 材料与方法

1．1 材料与试剂

1．2 仪器与设备

1．3 钝顶螺旋藻中 C-藻蓝蛋白的分离纯化

1．4 C-PC亚基的分离纯化

1．5 体外抗肿瘤细胞研究

2 结果

2．1 C-PC的高得率纯化

2．2 C-PC亚基的分离纯化

2．3 体外抗肿瘤细胞试验

3 讨论

参考文献 (REFERENCES)

附录

致谢

发布时间: 2005-10-10

参考文献

[1].重组腺伴随病毒载体表达双亚基蛋白质的研究[D]. 郝晓萌.第一军医大学2001
[2].缺氧过程中大鼠脑皮质线粒体细胞色素氧化酶活性及其亚基表达协调性的研究[D]. 谭小玲.第三军医大学2001
[3].钠泵α2亚基M4-M5区的克隆、表达及单抗的制备与鉴定[D]. 张玥.河北医科大学2011

C-藻蓝蛋白及其亚基的分离纯化和体外抗肿瘤研究

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