间接接触共培养下骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞及相关调控基因的时序表达

论文摘要

目的应用新生大鼠心肌细胞（cardiomyocytes,CMs）与骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）体外间接接触共培养的方法模拟心肌内环境,研究模拟环境下MSCs向CMs的分化情况及相关调控基因的时序表达,筛选MSCs定向分化为心肌细胞的重要调控基因。方法MSCs及CMs按1:5的比例进行体外间接接触共培养,连续观察两周,相差显微镜下观察MSCs形态变化,免疫荧光方法鉴定心肌特征性肌动蛋白α（α-actin）和肌钙蛋白T（cTnT）的表达,应用半定量RT-PCR分析TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、TEF-1等相关调控基因在分化过程中的时序表达。结果共培养前MSCs呈成纤维细胞样,共培养后细胞形态发生变化,细胞体积增大,梭形形态逐渐变短变粗,近似棒状或椭圆形,细胞之间形成连接,排列方向趋于一致。MSCs共培养前及共培养1天、3天未见cTnT及α-actin阳性表达,共培养5天、7天、14天时cTnT阳性细胞百分率分别为7.14%、22.43%、28.77%,α-actin阳性细胞百分率分别为9.20%、22.88%、28.89%。TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因在共培养后一天表达开始增强,共培养后七天达高峰,以后虽有所下降但仍维持在较高水平;TEF-1基因在诱导过程中表达无明显变化。结论间接接触共培养条件下MSCs可分化为心肌样细胞;且在此过程中,TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因可能是调控MSCs定向分化为心肌样细胞的重要调控基因。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 大鼠 MSCs 形态学观察及鉴定
• 3.2 新生大鼠 CMs 形态学观察及鉴定
• 3.3 共培养后 MSCs 形态学观察
• 3.4 共培养后 MSCs 免疫荧光检测及分化率计算
• 3.5 相关调控基因 mRNA 时序表达
• 第4章 讨论
• 4.1 MSCs 的生物学特性及体外培养
• 4.2 CMs 体外培养与纯化
• 4.3 MSCs 与 CMs 间接接触共培养及影响因素
• 4.4 相关调控基因时序表达与分化机制
• 4.5 MSCs 与 CMs 间接接触共培养启示及意义
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录 A
• 附录 B
• 附录 C
• 攻读学位期间的研究成果