SD大鼠颊粘膜鳞癌细胞系的建立及其生物学特性的研究

论文摘要

目的:建立SD大鼠口腔颊粘膜鳞状细胞癌细胞系,对其生物学特性进行观察和鉴定,为口腔癌的致病机制、诊断和治疗研究提供一个有用的细胞模型。 材料与方法:①采用4—硝基喹啉—1—氧化物（4-nitroquinoline-1-oxide,4NQO）加入饮水喂养SD大鼠,诱发其颊粘膜鳞状细胞癌;切取颊癌组织行病理诊断,同时做组织块原代培养;利用胰酶消化法和细胞克隆培养法筛选细胞。②相差显微镜、微分干涉显微镜观察活细胞形态;HE染色、透射电镜、扫描电镜等方法,观察固定细胞的形态,并鉴定细胞的组织来源;免疫组化染色检测广谱角蛋白（cytokeratin clone AE1/AE3,CK）和波形蛋白（vimentin,Vim）的表达。按3000个细胞/孔接种于96孔板,采用MTT法检测第21代和第65代细胞的群体倍增时间;平板克隆形成法检测单细胞的增殖能力（每25cm2培养瓶接种300个细胞,2周后固定、染色）。采用流式细胞仪检测细胞周期;分别计数100个第21和65代细胞的染色体条数,分析研究细胞的染色体倍性。采用TRAP-ELISA法检测肿瘤细胞和正常粘膜细胞端粒酶活性。③16只裸鼠双侧腋背部皮下均接种3×106个细胞（200μl）,观察20天,计算裸鼠皮下接种成瘤率;10只裸鼠每只尾静脉注射3×106个细胞（200μl）,24天后处死动物,计算裸鼠实验性肺转移率,并行组织病理学诊断,以观察细胞的体内成瘤和转移特性。④取裸鼠皮下移植瘤的组织块接种于其它裸鼠皮下,在裸鼠间连续传5代,观察皮下接种的各代组织块成瘤速度;裸鼠实验性肺转移组织块原代培养,培养细胞再行裸鼠尾静脉注射,连续裸鼠体内传5代筛选亚细胞系,并与母本细胞比较生物学特性,称量并计算各代裸鼠肺重/体重比值。⑤将SD大鼠按周龄分四组,各组分别为4只（32周龄）、4只（4周龄）、4只（4周龄）、6只（4周龄）,均分别在口底或颊部原位和皮下接种SDSCC-B细胞及其裸鼠移植瘤组织块。口底、颊部原位接种5×106个细胞（100μl）,皮下接种1×107个细胞（200μl）,分别饲养6、4、4、3个月,观察其同种异体接种成瘤情况。⑥采用SAS6.12统计软件包进行统计学分析。 结果:①4NQO诱发36周后,SD大鼠颊粘膜形成肿瘤,病理诊断为颊粘膜鳞状上皮细胞癌;组织块原代培养的细胞为混合生长的细胞,主要包括两大类——上皮样细胞和成纤维样细胞;经筛选培养后获得单一纯化的上皮细胞,至2005年3月20日,已体外连续传105代,维持培养时间为11个月零22天,细胞生长稳定。将该细胞系命名SD大鼠颊粘膜鳞状细胞癌细胞系（Sprague-Dawley rat buccal mucosa squamous cell carcinoma cell line,SDSCC-B）。②形态学观察体外培养的细胞,符合鳞癌细胞的形态学特征;免疫组化染色结果为CK和Vim阳性。细胞群体

论文目录

• 引言
• 第一章 SD大鼠颊粘膜鳞癌细胞的体外培养
• 第二章 SD大鼠颊粘膜鳞癌细胞的生物学性状鉴定
• 2.1 SD大鼠颊粘膜鳞癌细胞的形态学观察及上皮源性鉴定
• 2.2 SD大鼠颊粘膜鳞癌细胞的生长特性和细胞核型分析
• 2.3 SD大鼠颊粘膜鳞癌细胞裸鼠皮下接种及尾静脉注射致瘤实验
• 第三章 SDSCC-B细胞亚系的筛选和异体SD大鼠致瘤实验
• 3.1 SDSCC-B细胞亚系的筛选
• 3.2 SDSCC-B细胞异体SD大鼠致瘤实验
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 英文缩略词表
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果
• 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明