论文摘要
研究背景:肿瘤侵袭和转移是成功治疗肿瘤的最大障碍,也是目前恶性肿瘤病人的主要死因。前列腺素E2（PGE2）能够促进细胞增殖、抑制凋亡、诱导免疫抑制。部分研究还表明PGE2能够增加癌细胞与基质的黏附,促进黏附分子表达,激活细胞骨架系统,促进肿瘤的浸润和转移。对于PGE2诱使肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭的相关分子机制目前仍不十分清楚。黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）是非受体蛋白酪氨酸激酶。有学者研究发现FAK的过表达与转移癌和淋巴结转移相关,抑制FAK的活性或阻断其表达均能抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭。关于FAK及其下游Paxillin信号通路在肿瘤细胞增殖、迁移过程中的作用,目前知之甚少。本课题通过PGE2对肝细胞癌细胞（hepatocellular carcinoma cells,HCC）体外作用的实验研究,探讨了PGE2对肝细胞癌细胞黏附、迁移及侵袭的作用及其分子机制。研究内容:1.观察PGE2对肝细胞癌Huh7及Hep3B细胞黏附、迁移及侵袭的影响。2.检测PGE2对肝细胞癌Huh7及Hep3B细胞FAK、Paxillin、Erk2及相关磷酸化蛋白表达的影响。3.检测EGFR信号通路特异性抑制剂AG1478对肝细胞癌Huh7细胞黏附、迁移、侵袭能力及Paxillin、Erk2的蛋白表达的影响。4.检测EGFR信号通路特异性抑制剂AG1478对PGE2所诱导的肝细胞癌Huh7细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响。5.探讨FAK/Paxillin/Erk信号转导通路在PGE2影响肝细胞癌细胞黏附、迁移、侵袭能力中可能的作用。研究方法:1.细胞培养:取人肝细胞癌细胞株Huh7及Hep3B按常规方法培养。2.外源性PGE2处理后,使用WST-1法检测肿瘤细胞黏附能力的变化;Transwell小室检测肿瘤细胞迁移能力的变化;Transwell小室结合Matrix胶检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。3.Western Blot实验检测外源性PGE2对肝细胞癌Huh7及Hep3B细胞FAK、Paxillin、Erk2及相关磷酸化蛋白表达水平的影响。4.EGFR信号通路特异性抑制剂AG1478处理肿瘤细胞后,使用WST-1法检测其黏附能力的变化;Transwell小室检测迁移能力的变化:Transwell小室结合Matrix胶检测侵袭能力的变化;WesternBlot实验检测Paxillin及Erk2蛋白表达水平的变化。5.设对照组、PGE2组及PGE2+AG1478组,使用WST-1法检测其黏附能力的变化;Transwell小室检测迁移能力的变化;Transwell小室结合MatriX胶检测侵袭能力的变化;Western Blot实验检测Paxillin蛋白表达水平的变化。研究结果:1.外源性PGE2可明显增加肝细胞癌Huh7细胞的黏附、迁移及侵袭能力。10、20、50μmol/L PGE2作用后,细胞的相对黏附率较对照组分别增加了18.5%、57.9%及54%;迁移能力增加了6.1%、20%和23%;而侵袭能力也明显增加,分别是5%、30%和25%差异比较均有统计学意义（P＜0.05）。2.Western Blot实验结果发现:用外源性PGE2处理Huh7细胞及Hep3B细胞30 min后,FAK(Tyr397)、Paxillin(Tyr31)及Erk蛋白磷酸化水平显著增加;24 h后FAK及Paxillin蛋白表达水平也明显增加,但Erk2的蛋白表达始终未发生明显变化。3.EGFR信号通路特异性抑制剂AG1478作用Huh7细胞后,其黏附、迁移及侵袭能力分别下降了53%、56%及70%;同时细胞Paxillin及Erk2的蛋白表达水平也分别降低29%及18%。4.EGFR信号通路特异性抑制剂AG1478作用Huh7细胞后,由PGE2所诱导的Huh7细胞的黏附、迁移及侵袭能力分别下降了69%、74%及66%,同时胞內Paxillin的蛋白表达水平也较PGE2组明显下降了40%。研究结论:1.外源性PGE2可明显增加肝细胞癌Huh7细胞的黏附、迁移及侵袭能力。2.外源性PGE2可显著促进肝细胞癌Huh7细胞及Hep3B细胞FAK、Paxillin、Erk2的蛋白磷酸化,同时也促进相关蛋白表达水平的增加,从而激活FAK/Paxillin/Erk信号转导通路。3.EGFR通路可能参与了PGE2诱导的肿瘤细胞侵袭及肿瘤转移过程中的信号转导。4.PGE2可激活FAK/Paxillin/Erk信号转导通路,进而激活MAPK信号转导通路,促进肿瘤细胞的转移。
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