IL-10启动子-1082和-819位点多态性与肠易激综合症的关系

论文摘要

研究背景:肠易激综合症是一种功能性肠病,其发病率高,各国报道不等,从5%到20%,其发病机制尚不十分清楚,与多种因素有关,包括胃肠动力学异常、内脏感觉异常、精神因素、感染、食物不耐受、肠道菌群失衡等但几乎没有一种单一的发病机理能够完全解释IBS所有的临床表现,故认为该病是多因素综合作用的结果。近年发现IBS患者存在家族聚集现象,说明其发病可能与遗传有关,部分IBS患者肠道内长期存在低度炎症,这种长期存在的炎症可能导致了IBS患者的临床症状,IL-10是体内最重要的抑制炎症反应的细胞因子,IL-10基因启动子区存在多态性,其基因型不同可导致体内产IL-10数量的不同,IBS患者肠道的低度炎症可能与IL-10的产量低有关。本文通过对广东省普通人群IBS患者及正常对照者IL-10启动子区基因多态性的研究,探讨其基因多态性与IBS的关系。目的:探讨广东省普通人群IL-10基因型及等位基因的分布情况以及其与IBS发病的关系。材料与方法:1研究对象IBS病例来自2008年6月2009年6月期间到广州市第一人民医院消化内科就诊、无亲缘关系、愿意参加本研究且签同意书者。本组共313例,其中男性123例,女性190例,平均年龄42.3±14.6岁。入选标准包括:①根据IBS调查问卷符合“罗马III诊断标准”的患者,年龄≧18岁,②进行大便常规和细菌学检查以及结肠镜检查或X线钡灌肠,排除器质性疾患;③汉族,广东籍居民;④同意参加本实验者。对照组选自同期健康检查的正常人。本组共321例,其中男性130例,女性191例,年龄43.7±13.9岁。入选标准包括:①无IBS等功能性胃肠病样症状,②无消化系统及其他系统器质性疾病广东的汉族人;③与病例组的年龄等方面比较差异性小。排除标准:未定型IBS,严重心理精神异常,甲亢,糖尿病,功能性消化不良,腹部盆腔手术,胆囊结石,子宫肌瘤。2罗马Ⅲ诊断标准IBS采用2006年制定的罗马III诊断标准并按照其分型标准将IBS分为四个亚型,即腹泻型（IBS-D）、便秘型（IBS-C）及混合型（IBS-M）及未定型（IBS-U）。3基因型检测采用聚合酶链式反应结合限制性内切酶技术（PCR-RFLP）对IL-10启动子区–1082和–819位点进行基因型检测。抽取外周静脉血2ml（EDTA抗凝）,采用QIAamp DNA Mini Ki（tQIAGEN公司）提取DNA。IL-10-1082位点上游引物:5’– AACACTCCTCGCCGCAACC-3’,下游引物序列: 5’–TCTTACCTATC CCTACTTCC-3’,目的基因片段长度为143bp（引物应用primer 5.0软件设计,由英潍捷基公司合成）,反应条件:95℃预变性2分钟,95℃变性40秒,57℃退火40秒,72℃延伸1分钟,循环37个周期后72℃延伸10分钟。PCR产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳检验,并经快速限制性内切酶FastDigest MnlI（fermentas公司）酶切10分钟,酶切产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察电泳带,分析基因型。-819位点上游引物为:5’–GACAACACTACTAAGGCTCCTTTGGGA-3’,下游引物:5’-GTGAGCAAACTGAGGCACGAAAT-3’,目的基因片段长度315bp,它的PCR反应条件和随后分析基因型基本同-1082位点,但不同之处是60℃退火40秒和循环30个周期,以及用快速限制性内切酶FastDigest SSpI（Fermentas公司）酶切。4统计学方法IL-10启动子-1082和-819位点等位基因及基因型的频率采用直接计算法,两样本率的比较用X2检验,研究对象与基因遗传平衡规律（Hardy-Winberg平衡）的符合程度采用X2检验分析,公式为:X2=∑（期望值-预计值）/期望值,自由度=基因型数目-等位基因数目。统计分析应用SPSS 13.0统计包进行,p<0.05为差异有显著性。结果:1 IL-10-819位点的C、T等位基因及IL-10-1082位点的A、G等位基因的发生率在IBS组与正常对照组两组间差异无统计学意义（p>0.05）。IL-10-819位点的C、T等位基因频率在各亚型间无统计学差异,腹泻型（79.8%）和混合型T等位基因频率（77.1%）高于对照组（65.7%） （P<0.05）,便秘型与对照组无统计学差异。IL-10-1082位点的A、G等位基因频率在各亚型与对照组间无统计学差异,腹泻型与混合型间有统计学差异（P<0.05）。2 IL-10启动子-819位点T/T基因型频率IBS患者（51.1%）显著高于健康对照组（40.2%）,C/T基因型显著低于健康对照组,C/C基因型与对照组无统计学意义;-819位点T/T基因型频率IBS各亚型显著高于对照组,C/T基因型IBS各亚型显著低于对照组。C/C基因型在各亚型间的无显著性差别。-1082位点基因型差异无统计学意义;腹泻型IBS的-1082位点A/A基因型（93.3%）显著高于混合型IBS（82.4%）,A/G基因型低于混合型IBS,但与便秘型及对照组无统计学差异,混合型IBS各基因型与便秘型及对照组亦无统计学差异。3 IL-10启动子-819位点和-1082位点基因型组合（A/A+T/T）在IBS组频率（45.7%）显著高于对照组（36.1%）,而（A/A+C/T）频率（34.5%）低于对照组（43.9%）,（p<0.05）,其余5种组合在IBS与对照组间无显著差异。结论:广东地区人群IL-10基因启动子区G-1082-G/A、A-819-C/T存在多态性,分别有GG、GA、AA和CC、CT、TT基因型,IL-10启动子区域-819位点T/T基因型以及与-1082-A/A基因型结合可能与IBS发生有关。

论文目录

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• 结论
• 参考文献
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• 综述
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• 攻读硕士期间发表的文章
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