LPS模拟肽疫苗诱导保护性免疫应答的研究

论文题目: LPS模拟肽疫苗诱导保护性免疫应答的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 免疫学

作者: 罗海波

导师: 富宁

关键词: 脂多糖,噬菌体随机肽库,模拟肽,交叉表位,保护性免疫

文献来源: 第一军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 脂多糖(lipopolysacchride,LPS)是引起多种感染性疾病的革兰氏阴性(G~-)菌重要的共同致病物质,可导致败血性休克等严重病理变化。鉴于G~-菌内毒素血症的高发病率和严重危害,针对LPS的治疗与预防的研究始终是人们极为关注的课题。目前尚无LPS或类脂A拮抗剂用于临床或进入临床观察;而在预防方面,预存抗LPS抗体与败血症的发生、大样本住院肿瘤患者、烧伤、外科手术等因感染死亡例数呈负相关的现象早已被证实,即对LPS诱发的病理进程有明确的保护作用,但这种保护力只限于对接种菌或特定血清型的LPS;而被动输入抗体则有时相限制,即感染前1小时内应用有效,这显然只适于动物实验。理想的LPS疫苗应能诱导再次免疫应答,所产生的抗体应是具广谱预防与保护作用。目前LPS疫苗研制所面临的主要困难包括:①LPS为TI-I(非胸腺依赖抗原-I)型抗原,自然诱导产生的抗体亲和力低、调理杀菌力弱,且无再次抗体应答,亦不能诱导特异性细胞免疫;②源于不同种属、不同株乃至不同血清型的LPS可具不同的抗原性,只能诱导产生与接种菌或LPS结合的抗体。因而至今尚无批准进入临床实验的具广谱保护作用的LPS疫苗。针对上述存在的问题,本课题的主要研究思路是:利用噬菌体肽库筛选获得的短肽模拟LPS的保守性结构表位,将其抗原表位的化学性质由脂多糖改变为短肽,由此使TI抗原改变为TD抗原,进而诱导机体内产生有效的再次抗体应答和交叉保护性免疫。本课题组在前期的工作中,从噬菌体肽库中筛选了数十个模拟位克隆,选择三个模拟鼠伤寒杆菌LPS表位的序列合成短肽,并证明用这三种模拟短肽免疫动物后,可诱发机体产生针对鼠伤寒杆菌LPS的抗体应答,但由于所获模拟位合成肽的免疫原性较弱,加之当时以BSA为载体,所产生的抗体效价较低,保护作用亦不明显。据此,本研究着重解决了具交叉保护性抗体的纯化,并以

论文目录:

中文摘要

ABSTRACT

前言

第一章 LPS交叉保护性模拟位展示肽克隆的筛选

1.1 材料与方法

1.1.1 主要试剂

1.1.2 主要溶液配制

1.1.3 主要仪器与器材

1.1.4 抗LPS 2630交叉反应性多克隆抗体的纯化及鉴定

1.1.5 以纯化抗LPS多克隆抗体为靶对噬菌体环七肽库的筛选

1.1.6 噬菌体克隆鉴定

1.2 结果

1.2.1 兔抗S.Typhi血清及纯化抗LPS 2630抗体与LPS的结合反应

1.2.2 模拟LPS表位噬菌体环七肽克隆的获得

1.2.3 噬菌体克隆与包被的抗LPS 2630多克隆抗体的结合

1.2.4 抗L2630纯化多克隆抗体对噬菌体结合的抑制试验

1.2.5 S.Typhi LPS 7261对噬菌体克隆与抗S.Typhi LPS多体结合的抑制

1.2.6 阳性噬菌体克隆与多种属LPS多克隆抗体的结合

1.2.7 DNA测序及氨基酸序列分析

1.3 讨论

1.4 小结

第二章合成模拟肽疫苗的制备及抗原性与免疫原性鉴定

2.1 材料与方法

2.1.1 主要试剂和溶液

2.1.2 合成模拟肽的抗原性鉴定

2.1.3 合成肽的免疫原性鉴定

2.2 结果

2.2.1 合成模拟肽的抗原性鉴定

2.2.2 合成模拟肽的免疫原性鉴定

2.3 讨论

2.4 小结

第三章合成模拟肽疫苗诱导的保护性免疫反应

3.1 材料与方法

3.1.1 主要材料

3.1.2 实验方法

3.2 结果

3.2.1 合成模拟肽免疫小鼠诱导的对鼠沙门氏菌攻击的保护

3.2.2 合成模拟肽免疫小鼠诱导对内毒素性休克的保护

3.3 讨论

3.4 小结

全文总结

参考文献

缩略语词表

成果

在读期间撰写及发表文章

专利申请情况

参与基金项目

致谢

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发布时间: 2006-01-06

LPS模拟肽疫苗诱导保护性免疫应答的研究

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