力竭运动致大鼠慢性肾损伤机制及促红细胞生成素干预研究

论文摘要

目的：探讨力竭运动致大鼠慢性肾损伤机制及促红细胞生成素干预研究。方法：采用反复四周力竭运动建立大鼠慢性肾损伤模型,用人重组促红细胞生成素（rhEPO）对此模型进行干预。光学显微镜HE染色观察肾组织病理改变；电镜检测肾组织超微结构；TUNEL检测肾细胞凋亡；用分子生物化学法检测大鼠血清尿素氮、MDA、SOD、NO、NOS、Hb含量、RBC计数、尿蛋白含量；免疫组化、荧光标记和Western blotting检测肾组织EPO/EPOR、Caspase-3、Bcl-xl、NF-κB、TGF-B1、a-SMA、JAK2、Akt的蛋白表达。结果：1.反复4周大强度力竭运动后大鼠体重、跑距、血清、Hb显著性下降（P<0.05）,血清BUN、尿蛋白含量显著性增高（P<0.05）,肾组织结构及超微结构明显病理改变。2.反复四周力竭运动致慢性肾损伤后大鼠肾皮髓区的EPO和EPOR表达增强,与对照组比较,有统计学意义（P<0.05）。3.应用rhEPO后,力竭大鼠一般状况明显改善,跑距明显延长,与对照组相比,血BUN及尿蛋白均明显降低（P<0.05）,肾组织凋亡细胞明显减少（P<0.05）,肾组织超微结构、病理损伤明显改善。4.与正常对照组比较,rhEPO可明显升高NO、NOS活性及Bcl-xl、JAK2、Akt蛋白表达（P<0.05）,显著拮抗NF-κB、TGF-B1、a-SMA、Caspase-3表达（P<0.05）。结论：1.反复4周大强度力竭运动可致大鼠慢性肾损伤。2.反复4周力竭运动后,肾组织EPO/EPOR蛋白表达增加,提示内源性EPO/EPOR参与慢性肾损伤的内在修复机制。3. rhEPO能减轻力竭运动致大鼠慢性肾组织病理损伤和改善肾功能的同时,明显提高大鼠的体能及运动能力。考虑rhEPO可通过抗氧化应激反应,升高NO、NOS活性,拮抗炎性核因子NF-κB表达,拮抗致纤维化因子TGF-B1、a-SMA表达和（或）减少肾组织细胞的凋亡而减轻力竭运动致慢性肾损伤。4. rhEPO可以明显减少慢性肾损伤后凋亡细胞数量,可能与增加Bcl-xl、降低Caspase-3的表达而起到抗凋亡的作用。可能通过PI3K/Akt信号转导途径发挥保护作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 技术路线图
• 第一章 慢性肾损伤动物模型建立及EPO/EPOR在肾皮髓区的表达
• 1.1. 材料与方法
• 1.1.1 材料
• 1.1.1.1 实验动物
• 1.1.1.2 主要试剂
• 1.1.1.3 主要仪器设备
• 1.1.2 方法
• 1.1.2.1 动物分组与处理
• 1.1.2.2 标本制备
• 1.1.2.3 测定方法
• 1.1.3 质量监控
• 1.1.4 统计学分析
• 1.2. 结果
• 1.2.1 大鼠运动过程的一般情况
• 1.2.2 实验各组生化指标的观察
• 1.2.3 大鼠肾组织细胞形态学及超微结构检测结果
• 1.2.4 荧光标记法检测大鼠肾组织EPO/EPOR表达
• 1.2.5 免疫组化检测大鼠肾组织EPO/EPOR表达
• 1.2.6 Westernblot法检测大鼠肾EPO/EPOR的蛋白表达结果
• 1.3. 讨论
• 1.3.1 体重与力竭运动的关系
• 1.3.2 跑距与力竭运动的关系
• 1.3.3 力竭运动对大鼠携氧能力的影响
• 1.3.4 力竭运动对大鼠肾组织形态结构及超微结构的影响
• 1.3.5 力竭运动对大鼠肾功能的影响
• 1.3.6 EPO/EPOR在慢性肾损伤大鼠肾皮髓区的表达
• 1.4. 结论
• 第二章 rhEPO对大鼠力竭运动致慢性肾损伤的保护作用及机制的研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.1.1 实验动物
• 2.1.1.2 实验材料
• 2.1.2 方法
• 2.1.2.1 动物分组与处理
• 2.1.2.2 标本制备
• 2.1.2.3 测定方法
• 2.1.3 统计学分析
• 2.2. 结果
• 2.2.1 大鼠运动过程的一般情况
• 2.2.2 实验各组生化指标的观察
• 2.2.2.1 血红蛋白的含量
• 2.2.2.2 红细胞计数
• 2.2.2.3 尿蛋白含量
• 2.2.2.4 血清尿素氮含量
• 2.2.2.5 大鼠肾组织MDA含量
• 2.2.2.6 大鼠肾组织SOD含量
• 2.2.2.7 大鼠肾组织NO含量
• 2.2.2.8 大鼠肾组织NOS含量
• 2.2.3 大鼠肾组织细胞形态学及超微结构检测结果
• 2.2.4 TUNEL法标记肾组织细胞凋亡情况
• 2.2.5 凋亡相关因子Bcl-xl、Caspase-3的蛋白表达
• 2.2.6 NF-κB、TGF-B1及a-SMA的蛋白表达
• 2.2.7 大鼠肾组织细胞凋亡及其相关分析
• 2.3 讨论
• 2.4 结论
• 第三章 rhEPO对力竭运动致大鼠慢性肾损伤信号转导通路的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.1.1 实验动物
• 3.1.1.2 实验材料
• 3.1.1.3 动物分组与处理
• 3.1.2 方法
• 3.1.2.1 标本制备
• 3.1.2.2 测定方法
• 3.1.3 统计学分析
• 3.2 结果
• 3.2.1 力竭运动致慢性肾损伤模型中rhEPO在PI3K/Akt通路的激活作用
• 3.2.2 PI3K抑制剂LY294002拮抗rhEPO对力竭运动致慢性肾损伤的保护作用
• 3.2.3 rhEPO对Caspase-3活性的抑制作用
• 3.3 讨论
• 3.4 结论
• 综合结论
• 本课题的创新点
• 参考文献
• 综述一
• 参考文献
• 综述二
• 参考文献
• 附： 英文缩略词表
• 在读博士期间发表的主要论文、承担课题及获奖情况
• 致谢