论文摘要
近年来,肿瘤耐药已成为临床肿瘤治疗面临的重要问题之一,研究肿瘤细胞耐药性的产生机制和探索逆转耐药的途径是肿瘤研究领域的一个重要方向。肿瘤耐药性可分为原发性耐药和获得性耐药,临床常见多属获得性耐药。目前认为,肿瘤原发性耐药与基因遗传学水平的变异密切相关,而肿瘤获得性耐药与基因表观遗传学水平的变异密切相关。表观遗传学不涉及DNA序列改变,主要通过DNA位点甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA调控三个方面调控相关基因的表达,在肿瘤获得性耐药产生机制中可能发挥重要作用。microRNA（miRNA）作为新近发现的转录后调控的重要分子,广泛参与了各种生命活动过程,如:生物进化与发育,细胞分化与恶变,细胞增殖与凋亡等。近年来,miRNA与肿瘤耐药关系的研究日新月异,给肿瘤耐药机制的研究提供了新的思路,上调或抑制肿瘤耐药相关miRNA的表达具有调控肿瘤耐药的功能。目前miRNA调控胃癌耐药的报道较少,已有研究发现:miR-15b,miR-16和miR-181b,miR-497在胃癌多药耐药耐药株SGC-7901/VCR中低表达,分别上调上述miRNAs可靶向抑制抗凋亡蛋白BCL2进而部分逆转细胞的多药耐药表型。为进一步深入研究microRNA在胃癌耐药细胞中的作用与分子机制,本实验进行了如下研究。方法1.运用miRNA芯片表达谱联合miRNA实时荧光定量RT-PCR检测分别比较胃癌耐药细胞SGC7901/VCR和其亲本细胞SGC7901之间miR-125b表达差异。2.运用瞬时转染miR-125b模拟物的方法干预耐药细胞中miR-125b的表达,通过MTT法体外药物敏感性实验检测其对细胞耐药表型的影响。3.运用荧光素酶靶基因验证实验明确miR-125b的靶基因,并通过Western blot和流式细胞术分析miR-125b调控耐药的内在机制。结果1. SGC7901/VCR细胞中miR-125b的表达水平显著低于亲本细胞,抗凋亡蛋白BCL2和MCL1的表达水平显著高于亲本细胞。2.转染miR-125b模拟物可显著上调耐药细胞中miR-125b表达水平,并显著增加耐药细胞对化疗药物的敏感性。3.荧光素酶实验证实BCL2,MCL1是miR-125b的靶基因。4.转染miR-125b模拟物的耐药细胞中BCL2,MCL1蛋白表达水平显著低于转染对照物的耐药细胞,且转染miR-125b模拟物的耐药细胞对化疗药物诱导凋亡的敏感性显著高于转染对照物的耐药细胞。结论miR-125b在胃癌耐长春新碱细胞中表达水平显著低于相应亲本细胞, miR-125b的表达下调可以通过抗凋亡蛋白BCL2,MCL1介导胃癌细胞对多种化疗药物的耐药。