论文摘要
目的:探讨灯盏花素（breviscapine,Bre）对老龄大鼠肾缺血再灌注损伤（renal ischemia/reperfusion injury,RIRI）的保护作用及其机制,为灯盏花素在临床防治RIRI提供实验依据。方法:将40只25月龄SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、小剂量Bre组、中剂量Bre组及大剂量Bre组共5组,每组8只。先切除右肾,然后阻断左肾血流45min,恢复左肾血供24h的方法建立肾缺血再灌注损伤动物模型。除假手术组外各组均需建立RIRI动物模型,实验各组处理如下:假手术组,开腹后切除右肾,45min后关腹,术前五天每天一次及术后一次经尾静脉注射同Bre组等量的生理盐水;缺血再灌注组,术前术后用药方法同假手术组;小剂量、中剂量及大剂量Bre组,术前五天每天一次及术后一次按时用药,经尾静脉注射Bre注射液,剂量分别为小剂量Bre组（5mg/kg）、中剂量Bre组（10mg/kg）、大剂量Bre组（20mg/kg）。实验各组均于术前30min肌注青霉素（1万u/100g）预防感染,术后24小时处死动物,采集大鼠静脉血检测血清肌酐（serum creatinine,Scr）、尿素（urea,Ur）指标评价肾功能;取左肾采用HE染色光镜观察各组肾组织的变化,用硫代巴比妥酸法测定肾组织丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量及黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力;用TUNEL法检测肾组织细胞凋亡率（apoptosis rate,AR）;用免疫组化法检测肾组织Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的变化;用Western-blotting检测肾组织P53活性蛋白表达量。结果:⑴Scr和Ur:缺血再灌注组较假手术组升高（P<0.05）;各剂量Bre组较缺血再灌注组下降（P<0.05）;大剂量Bre组较中、小剂量Bre组降低（P<0.05）;各Bre组组间血清Ur值无统计学差异（P>0.05）。⑵光镜观察:假手术组可见部分的肾小球硬化、基底膜皱缩,部分的肾小管上皮细胞萎缩;缺血再灌注组见肾小管扩张、肾小管上皮细胞水肿、部分上皮细胞核溶解、管腔内可见肾小管上皮细胞碎片,余观察结果同假手术组;各剂量Bre组,肾小管扩张减轻、肾小管上皮细胞水肿有所减轻、核溶解细胞数减少,余观察结果同假手术组。⑶MDA和SOD:缺血再灌注组较假手术组MDA量升高（P<0.05）,SOD活力降低（P<0.05）;各剂量Bre组较缺血再灌注组MDA量下降（P<0.05）,SOD活力升高（P<0.05）;大剂量Bre组较中、小剂量Bre组MDA量降低（P<0.05）,SOD活力升高（P<0.05）;中、小剂量Bre组间的MDA、SOD无统计学差异（P>0.05）。⑷细胞AR:缺血再灌注组较假手术组升高（P<0.05）;各剂量Bre组均较缺血再灌注组降低（P<0.05）;大剂量Bre组较中、小剂量Bre组降低（P<0.05）;中、小剂量Bre组间无统计学差异（P>0.05）。⑸Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达:缺血再灌注组均较假手术组升高（P<0.05）;各剂量Bre组较缺血再灌注组的Caspase-3和Bax蛋白表达下降（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05）;大剂量Bre组较中、小剂量Bre组Caspase-3和Bax蛋白表达降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05）;中、小剂量Bre组间的Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达无统计学差异（P>0.05）。⑹P53蛋白表达量:缺血再灌注组较假手术组升高（P<0.05）;各剂量Bre组较缺血再灌注组下降（P<0.05）,中、大剂量Bre组较小剂量Bre组降低（P<0.05）;中、大剂量Bre组间p53蛋白表达无统计学差异（P>0.05）。结论:老龄大鼠肾组织发生衰老的形态学改变,对缺血再灌注甚损伤敏感。缺血再灌注损伤可导致肾功能损害和细胞凋亡,表现为Scr及Ur值升高,细胞AR增加,MDA量增加,SOD活力降低,Caspase-3、Bcl-2、Bax、p53蛋白表达增强。Bre对大鼠RIRI具有显著保护作用,体现为,用药后各剂量Bre组与缺血再灌注组相比,血清肌酐及尿素值降低,细胞AR降低,MDA量降低,SOD活力增加,Bcl-2蛋白表达增强,Caspase-3、Bax和p53蛋白表达显著减弱。并且大剂量Bre组较中、小剂量Bre组保护作用强,该保护作用可能与Bre能清除ROS,抑制Caspase-3、Bax、p53表达及促进Bcl-2表达,从而抑制细胞凋亡有关。