鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株部分生物学特性的研究及荧光实时定量PCR检测方法的建立和应用

论文题目: 鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株部分生物学特性的研究及荧光实时定量PCR检测方法的建立和应用

论文类型: 博士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 郭宇飞

导师: 程安春,汪铭书

关键词: 鸭病毒性肠炎病毒强毒株,形态,形态发生,实时定量,病毒纯化

文献来源: 四川农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本论文对鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)部分生物学特性及荧光实时定量PCR对其检测方法的建立和应用进行了研究,主要内容可归纳如下: 1.对DEV-CHv进行了适应在DEF上生长的研究。10日龄鸭胚经胰酶消化和机械分散后,其成纤维细胞在含10%小牛血清的MEM营养液中生长36h左右后成为致密的细胞单层。DEV-CHv人工感染成年健康鸭后,取病死鸭肝脏组织接种绒毛尿囊腔经10日龄鸭胚连续传代2次,然后取病毒致死鸭胚绒毛尿囊液接种DEF的方法可以使DEV-CHv开始适应在DEF上生长;而病死鸭肝脏组织中的DEV-CHv直接接种在DEF上不能生长。刚刚适应了在DEF上生长的DEV-CHv以细胞变圆,细胞折光度增强,细胞间隙有颗粒状缺失出现为主要病变特征;DEV-CHv经过连续传代6次适应了在DEF上生长以后,细胞病变以成纤维细胞的脱落和形成圆形蚀斑为主要病变特征。DEV-CHv接种DEF后通常30h左右出现细胞脱落,36h左右在细胞单层上形成明显的蚀斑,到48h时细胞病变可达80%以上。通过对飞片的染色镜检可以发现,DEV-CHv可在DEF中形成嗜酸性核内包涵体,可使DEF发生细胞融合而产生含有10多个细胞核的合胞体。 2.通过超薄切片和透射电子显微镜技术对DEV-CHv在DEF中的形态学和形态发生学进行了研究。其中形态学方面的研究结果表明:DEV-CHv病毒核酸呈圆形颗粒状,直径35nm—45nm,在胞核内常集中分布;病毒核衣壳呈圆形,直径90nm—100nm,在胞核和胞浆内都有分布;病毒核衣壳根据所含核酸形态的差异可分为空心核衣壳、内壁附有颗粒型核衣壳、同心圆形核衣壳和实心核衣壳,其中的内壁附有颗粒型核衣壳又可分为三角星形、四角星形、五角星形、六角星形核衣壳等多种类型;DEV-CHv成熟病毒粒子具有囊膜和皮层结构,呈圆形,直径150nm—300nm,常见位于胞浆空泡内;DEV-CHv在DEF中可形成胞浆内包涵体和胞核内包涵体结构;伴随子代病毒在细胞中的出现,胞浆内还出现了豆荚状、马

论文目录:

作者声明

中文摘要

英文摘要

本论文中常用的英文缩写词汇含义说明

第一部分文献综述

第一章．鸭病毒性肠炎研究进展

第二部分实验研究

第二章．鸭病毒性肠炎病毒 CH强毒株适应鸭胚成纤维细胞的研究

材料方法

实验结果

讨论

小结

第二章图示

第三章．鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株在鸭胚成纤维细胞中形态结构和形态

发生学的研究

材料方法

实验结果

讨论

小结

第三章图示

第四章．鸭病毒性肠炎病毒 CH强毒株致鸭胚成纤维细胞发生细胞凋亡作用的研究

材料方法

实验结果

讨论

小结

第四章图示

第五章． TaqMan-MGB探针荧光实时定量 PCR检测鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株方法的建立和应用

材料方法

结果与讨论

小结

第六章．从鸭胚成纤维细胞中分离纯化鸭病毒性肠炎病毒 CH强毒株方法的研究

材料方法

实验结果

讨论

小结

第七章．鸭病毒性肠炎病毒 CH强毒株的结构蛋白分析

材料方法

结果与讨论

小结

第三部分结论

附录论文附表和附图

参考文献

致谢

作者简介以及攻读博士学位期间发表的学术论文

发布时间: 2005-10-27

鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株部分生物学特性的研究及荧光实时定量PCR检测方法的建立和应用

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