论文摘要
本文实地考察与采集长白山区5种橐吾并详细观察了其形态特征,利用石蜡切片技术观察了5种橐吾叶片的解剖结构,利用RAPD分子标记技术对长白山区5种橐吾20份样品进行了遗传多样性研究,旨为探讨长白山区5种橐吾间的相互区别和相互间的亲缘关系,对长白山区橐吾属植物的进一步开发与利用提供理论依据。研究结果归纳如下：1、5种橐吾的形态解剖学研究（1）根据文献记录、标本整理和实地考察结果,编制了非常简便的长白山区5种橐吾的检索表。（2）’长白山区5种橐吾叶片结构为叶肉组织分化明显的异面叶,其结构是由表皮、叶肉和叶脉三部分组成的,海绵组织发达。长白山橐吾、全缘橐吾的表皮附有少量腺毛；蹄叶橐吾、狭苞橐吾和复序橐吾表皮未见腺毛。五种橐吾属植物主脉维管束个数为多个,维管束类型为双韧维管束,单头橐吾和全缘橐吾的侧脉维管束十分发达。（3）通过长白山区5种橐吾组织结构数据的比较可知,蹄叶橐吾、狭苞橐吾、复序橐吾、单头橐吾和全缘橐吾的主脉直径、叶片厚度、上表皮厚度、下表皮厚度、海绵组织厚度、栅栏组织厚度差异显著,叶片组织结构紧密度、叶片组织结构疏松度、栅栏／海绵组织差异不显著。2、RAPD遗传多样性研究（1）利用SDS法（Ⅰ）、改良CTAB1法（Ⅱ）和改良CTAB2法（Ⅲ）均可提取橐吾属植物基因组DNA,但每种提取方法所获得的DNA在提取量、浓度、纯度上有所差异。提取DNA纯度由高到低依次为Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ；提取DNA浓度由大到小依次为Ⅲ>I>II; DNA提取量的多少依次为Ⅲ>Ⅰ>Ⅱ。SDS法、改良CTAB1法（Ⅱ）由于DNA的提取纯度及提取量不高很难进行后续的PCR扩增,改良CTAB2法（Ⅲ）能够大量提取直接用于PCR扩增的较高纯度的DNA,所以是较好的提取方法。（2）利用蹄叶橐吾获得长白山区5种橐吾20份样品的RAPD-PCR扩增体系为PCR反应总体积为20μL,其中包括模板DNA 20ng,引物lOpmol/L, Taq聚合酶1.5Unit, dNTP300μmol/L, MgCl21.5mmol/L, lOXBuffer缓冲液1μL,其余用无菌重蒸馏水补充。扩增程序为反应程序为94℃预变性5min；94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min30s,循环40次；最后72℃延伸10min。（3）利用12个随机引物对长白山区5种橐吾20份样品进行RAPD-PCR扩增,共产生52条多态性条带,多肽率为71.43%。五种橐吾的20份样品的遗传距离在0.08-0.49之间,平均遗传距离为0.29。供试材料间最小遗传距离为0.08,出现在1号栽培蹄叶橐吾和2号栽培蹄叶橐吾之间,这两份材料均为多年栽培材料；最大遗传距离为0.49,出现在1号栽培蹄叶橐吾和20号全缘橐吾之间,说明亲缘关系较远。（4）在遗传距离0.248水平上,长白山区5种橐吾20份样品可分为三大类。即第一大类是由全部蹄叶橐吾来构成；第二大类是由狭苞橐吾、复序橐吾和单头橐吾三种来构成；第三大类是由全缘橐吾一种来构成。复序橐吾与狭苞橐吾先聚类,而后与长白山橐吾聚类,再与全缘橐吾聚类,最后与蹄叶橐吾聚类。说明复序橐吾与狭苞橐吾间的亲缘关系最近,而后与长白山橐吾间较近,再后与全缘橐吾间较近,蹄叶橐吾与全缘橐吾间的亲缘关系最远。