论文摘要
目的多发性硬化（multiple sclerosis，MS）是中枢神经系统炎性脱髓鞘性疾病，具有复发、迁延、致残率高等特点。由于MS标本不易获取，限制了对该疾病的研究，因此建立相应的动物模型是研究MS病理过程、发病机制的重要途径。本实验用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelinoligodendrocyte glycoprotein35-55，MOG35-55)多肽诱导C57BL／6小鼠，尝试建立稳定、可靠、发病率高的MS的动物模型—实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE），并初步探讨其发病的免疫学机制，为进一步开展对MS发病机制和防治方法的研究奠定基础。方法1．用含300μg或150μg MOG35-55抗原的乳化产物皮下免疫C57BL／6小鼠，6天后进行二次免疫，同时在第一次免疫后立即和2天后腹腔注射0.1 ml百日咳杆菌菌液，诱导C57BL／6小鼠的EAE模型。通过对小鼠体重，症状及中枢神经系统病理改变的观察，评估EAE模型的建立情况。2．应用MTT法检测小鼠脾脏T淋巴细胞活化增殖程度；应用间接ELISA技术测定小鼠血清中抗MOG35-55抗体水平；应用双抗体夹心法检测小鼠血清中IFN-γ的浓度。通过比较EAE小鼠和正常小鼠T淋巴细胞的增殖、血清抗MOG35-55抗体和IFN-γ变化情况的不同，初步探讨EAE发病的免疫学机制。结果1．150μg MOG35-55剂量组小鼠发病率为80％，最高临床评分为3分；300μg MOG35-55剂量组发病率为100％，最高临床评分可达5分，且脑脊髓组织切片显示炎性细胞浸润和白质脱髓鞘等病理改变，300μg MOG35-55剂量组中枢神经系统病理改变较明显。2．用不同浓度的MOG35-55蛋白刺激EAE小鼠脾脏T淋巴细胞发现，在0.5～5.0μg／ml的范围内，刺激指数随浓度增加而增大，即T细胞增殖随浓度增加而增强；在15.0～50.0μg／ml范围内，随浓度的增加，T细胞增殖无明显变化。3．不同发病状态检测血清抗体发现，在发病初（ip 2w）抗体阳性，在发病高峰（ip 3w）抗体异常升高，随着病情缓解抗体又逐渐下降。血清抗体与疾病的发生发展有一定的关系。4．检测不同发病状态的小鼠血清中的IFN-γ水平，发现随评分的增加血清中IFN-γ的水平升高。结论1．我们将MOG35-55与CFA充分乳化后，皮下免疫C57BL／6小鼠，外加腹腔注射百日咳菌液，成功的构建了C57BL／6慢性单时相EAE模型，该模型不仅发病率高、稳定可靠，而且病理改变接近MS，是研究MS的理想动物模型。2．通过比较EAE小鼠和正常小鼠T淋巴细胞的增殖、血清抗MOG35-55抗体和IFN-γ水平的不同，显示T细胞的活化、抗体的升高、细胞因子的异常可能共同导致了EAE的发生。为以后进一步开展对MS发病机制和治疗的研究奠定基础。
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