鸡毒支原体F弱毒疫苗对肉鸡生长及免疫性能影响的研究

论文摘要

鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）是引发鸡慢性呼吸道疾病（chronic respiratory disease，CRD）和火鸡传染性窦炎（infectious sinusitis）的主要病原菌。MG在国内鸡场的感染率很高，除大多数的祖代种鸡场进行疫苗免疫外，商品蛋鸡和肉鸡场多数都只用药物来维持鸡群的健康，使MG的彻底控制存在一定的局限性，也给养禽业造成了巨大经济损失。因此，利用MG F疫苗对CRD进行防控具有重要的现实意义。本研究的目的主要包括：①建立一种快速、特异的双重PCR检测方法，以区别MG F疫苗株与MG强毒株；②研究MG F疫苗免疫对商品肉鸡和种肉鸡生产及免疫性能的影响，并探索其合理免疫程序。本研究内容包括以下几个部分：试验一：鸡毒支原体强毒株与F疫苗株双重PCR检测方法的建立试验选用标准MG F弱毒疫苗株和国际实验室公认MG标准强毒R株，根据R株的pvpA基因序列和F疫苗株假定的α磷酸海藻糖酶基因序列，设计2对引物R1、R2和F1、F2，在单一PCR的基础上，建立检测MG强毒株和F疫苗株的双重PCR方法。该方法特异性强，敏感度高，能同时检测的MG R株和F株的DNA最低含量分别为0.45ng和0.25ng。与传统的MG分离鉴定方法相比，该方法操作简便，能直接对临床样品进行检测，并区分出强、弱毒株，为MG阴性鸡群的建立提供了重要的技术手段。试验表明，喉、气管棉拭子为首选检测对象，其结果具有良好的实际应用价值。试验二：鸡毒支原体F疫苗对商品肉鸡生长及免疫性能的影响试验选用200只1日龄健康三黄肉鸡，采用单因素4水平随机设计，每组50只，分为免疫攻毒组、攻毒组、免疫组和对照组，相应为试验一组、试验二组、试验三组和对照组。在1日龄和16日龄对试验一组和三组进行两次F疫苗免疫，并在24日龄时对试验一组和二组进行攻毒，统计每组鸡1-42日龄的增重和耗料量；在攻毒后隔7天每组剖杀5只鸡，采集喉拭子、气囊拭子和喉头、肺脏、肝脏等组织，运用双重PCR方法检测，并进行心脏采血，对血清中钙离子（SCA）、磷离子（SP）、总胆固醇（SCHOL）、总蛋白（TP）和尿素氮（SUN）成分进行测定分析；对31日龄和38日龄所采血液通过HA-HI试验进行NDV免疫抗体检测分析。结果显示，免疫攻毒组所检测到的R株数比攻毒组低60%。免疫组总增重优于其它三组，较试验一组、二组和三组分别提高了14.2%、19.66%和10.38%，差异显著（p<0.05），料重比分别低0.12、0.37和0.14；抗体水平也一直维持在较高的滴度，与攻毒组之间存在显著差异性（p<0.05），与对照组相比前期差异显著（p<0.05），后期无显著差异（p>0.05），而与免疫攻毒组之间无显著性差异（p>0.05）；不同时期各组血液指标值组间差异并不显著（p>0.05）。表明免疫MG F疫苗，能够抑制后续MG感染，改善商品肉鸡生长性能，降低MG强毒对NDV疫苗的影响，增强免疫效果，并且不影响体内的代谢平衡，有利于提高养殖效益。试验三：鸡毒支原体F疫苗对种肉鸡生长及免疫性能的影响试验选用3000只1日龄健康的三黄种肉鸡，采用单因素2水平设计，每组1500只，分为免疫组和对照组，相应为试验一组和试验二组。1日龄时对试验一组进行MG F疫苗免疫，并于5日龄、30日龄和40日龄时采集两组鸡喉棉拭子样品，运用PCR方法进行检测；分别统计0-22日龄、22-32日龄、32-40日龄和0-40日龄期间各组鸡的增重、耗料量和死淘率；在31日龄、38日龄进行采血，通过HA-HI试验进行NDV和AIV（H9）免疫抗体检测分析。结果显示，免疫组检测到的野毒株的量低于对照组；整个试验期总增重较对照组提高了3.6%，料重比低0.14，差异显著（P<0.05），而且在不同阶段也都存在显著性差异（P<0.05）；两种免疫抗体水平比对照组都高，差异显著（p<0.05）。表明免疫MG F疫苗，能够抑制后续MG的感染，改善种肉鸡生长性能，降低MG强毒对NDV和AIV疫苗的影响，增强免疫效果，提高养殖经济效益。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 插图和附表清单
• 主要缩略语列表
• 文献综述
• 1 病原学特性
• 2 分子生物学特性
• 3 致病机理
• 4 免疫机理
• 5 流行病学
• 6 临床症状和病理变化
• 7 诊断
• 8 防制
• 9 问题与展望
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 菌株
• 2.1.2 试验动物
• 2.1.3 主要试剂与溶液配制
• 2.1.4 其它试剂的配制
• 2.1.5 主要仪器
• 2.1.6 引物设计与合成
• 2.2 方法
• 2.2.1 双重 PCR 方法的建立
• 2.2.2 MG 的分离培养与鉴定
• 2.2.3 MG F 疫苗对商品肉鸡生长及免疫性能的影响
• 2.2.4 MG F 疫苗对种肉鸡生长及免疫性能的影响
• 3 结果
• 3.1 双重 PCR 方法的建立
• 3.1.1 双重 PCR 方法的确立
• 3.1.2 双重 PCR 方法的特异性检测
• 3.1.3 双重 PCR 方法的敏感性检测
• 3.1.4 双重 PCR 方法检测临床样品
• 3.2 MG 的分离培养与鉴定
• 3.2.1 MG 的分离结果
• 3.2.2 MG 分离株形态观察
• 3.2.3 MG 分离株双重 PCR 方法鉴定
• 3.2.4 MG 分离株 pvpA 基因序列分析
• 3.3 MG F 疫苗对商品肉鸡生长及免疫性能的影响
• 3.3.1 MG R 株颜色变化单位（CCU）的测定
• 3.3.2 双重 PCR 检测结果
• 3.3.3 生长性能指标的测定
• 3.3.4 血液指标检测结果
• 3.3.5 NDV 免疫抗体检测结果
• 3.4 MG F 疫苗对种肉鸡生长及免疫性能的影响
• 3.4.1 双重 PCR 检测结果
• 3.4.2 生长性能指标的测定
• 3.4.3 免疫抗体检测结果
• 4 讨论
• 4.1 双重 PCR 方法的临床应用意义
• 4.2 MG 检测结果分析
• 4.3 MG F 疫苗免疫对鸡群生长性能的影响
• 4.4 MG F 疫苗免疫对肉鸡血液指标的影响
• 4.5 MG F 疫苗免疫对 NDV 和 AIV 免疫抗体效价的影响
• 4.6 MG F 疫苗免疫程序的制定
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介
• 在读期间发表的论文