论文摘要
鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是引发鸡慢性呼吸道疾病(chronic respiratory disease,CRD)和火鸡传染性窦炎(infectious sinusitis)的主要病原菌。MG在国内鸡场的感染率很高,除大多数的祖代种鸡场进行疫苗免疫外,商品蛋鸡和肉鸡场多数都只用药物来维持鸡群的健康,使MG的彻底控制存在一定的局限性,也给养禽业造成了巨大经济损失。因此,利用MG F疫苗对CRD进行防控具有重要的现实意义。本研究的目的主要包括:①建立一种快速、特异的双重PCR检测方法,以区别MG F疫苗株与MG强毒株;②研究MG F疫苗免疫对商品肉鸡和种肉鸡生产及免疫性能的影响,并探索其合理免疫程序。本研究内容包括以下几个部分:试验一:鸡毒支原体强毒株与F疫苗株双重PCR检测方法的建立试验选用标准MG F弱毒疫苗株和国际实验室公认MG标准强毒R株,根据R株的pvpA基因序列和F疫苗株假定的α磷酸海藻糖酶基因序列,设计2对引物R1、R2和F1、F2,在单一PCR的基础上,建立检测MG强毒株和F疫苗株的双重PCR方法。该方法特异性强,敏感度高,能同时检测的MG R株和F株的DNA最低含量分别为0.45ng和0.25ng。与传统的MG分离鉴定方法相比,该方法操作简便,能直接对临床样品进行检测,并区分出强、弱毒株,为MG阴性鸡群的建立提供了重要的技术手段。试验表明,喉、气管棉拭子为首选检测对象,其结果具有良好的实际应用价值。试验二:鸡毒支原体F疫苗对商品肉鸡生长及免疫性能的影响试验选用200只1日龄健康三黄肉鸡,采用单因素4水平随机设计,每组50只,分为免疫攻毒组、攻毒组、免疫组和对照组,相应为试验一组、试验二组、试验三组和对照组。在1日龄和16日龄对试验一组和三组进行两次F疫苗免疫,并在24日龄时对试验一组和二组进行攻毒,统计每组鸡1-42日龄的增重和耗料量;在攻毒后隔7天每组剖杀5只鸡,采集喉拭子、气囊拭子和喉头、肺脏、肝脏等组织,运用双重PCR方法检测,并进行心脏采血,对血清中钙离子(SCA)、磷离子(SP)、总胆固醇(SCHOL)、总蛋白(TP)和尿素氮(SUN)成分进行测定分析;对31日龄和38日龄所采血液通过HA-HI试验进行NDV免疫抗体检测分析。结果显示,免疫攻毒组所检测到的R株数比攻毒组低60%。免疫组总增重优于其它三组,较试验一组、二组和三组分别提高了14.2%、19.66%和10.38%,差异显著(p<0.05),料重比分别低0.12、0.37和0.14;抗体水平也一直维持在较高的滴度,与攻毒组之间存在显著差异性(p<0.05),与对照组相比前期差异显著(p<0.05),后期无显著差异(p>0.05),而与免疫攻毒组之间无显著性差异(p>0.05);不同时期各组血液指标值组间差异并不显著(p>0.05)。表明免疫MG F疫苗,能够抑制后续MG感染,改善商品肉鸡生长性能,降低MG强毒对NDV疫苗的影响,增强免疫效果,并且不影响体内的代谢平衡,有利于提高养殖效益。试验三:鸡毒支原体F疫苗对种肉鸡生长及免疫性能的影响试验选用3000只1日龄健康的三黄种肉鸡,采用单因素2水平设计,每组1500只,分为免疫组和对照组,相应为试验一组和试验二组。1日龄时对试验一组进行MG F疫苗免疫,并于5日龄、30日龄和40日龄时采集两组鸡喉棉拭子样品,运用PCR方法进行检测;分别统计0-22日龄、22-32日龄、32-40日龄和0-40日龄期间各组鸡的增重、耗料量和死淘率;在31日龄、38日龄进行采血,通过HA-HI试验进行NDV和AIV(H9)免疫抗体检测分析。结果显示,免疫组检测到的野毒株的量低于对照组;整个试验期总增重较对照组提高了3.6%,料重比低0.14,差异显著(P<0.05),而且在不同阶段也都存在显著性差异(P<0.05);两种免疫抗体水平比对照组都高,差异显著(p<0.05)。表明免疫MG F疫苗,能够抑制后续MG的感染,改善种肉鸡生长性能,降低MG强毒对NDV和AIV疫苗的影响,增强免疫效果,提高养殖经济效益。
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