论文摘要
显微操作过程中卵母细胞体内外会产生过量的活性氧,对卵母细胞产生有害影响。在显微操作液中添加适当的抗氧化剂会清除过量的活性氧。在注核操作液中添加咖啡因有可能提高重组胚的卵裂率和后期发育率。因此实验通过研究显微操作液中添加不同物质对重组胚发育率的影响,来探讨如何提高延边黄牛体细胞克隆效率,从而为新兴起的转基因克隆以及治疗性克隆奠定理论基础。研究结果如下:实验一,在显微操作液（包括去核、注核操作液）中分别添加0μM,50μM,100μM,150μM的维生素E,分别测定它们对重组胚发育的影响,从而确定显微操作液中添加维生素E的适宜浓度。在卵裂率和囊胚发育率上,100μM组是最高的,分别是89.68%和28.57%（p＜0.05）,显著高于0μM组。结果表明,添加VE的适宜浓度为100μM。实验二,在显微操作液中分别添加0mM,0.3mM,0.6mM,0.9mM,1.2mM的L-半胱氨酸。在卵裂率上,0.9mM组显著高于0mM和1.2mM（90.56%vs 81.18%和80.95%,p＜0.05）,其他组之间差异不显著;囊胚发育率,0.6mM和0.9mM组之间差异不显著（31.85%vs35.38%,p＞0.05）,而显著高于其他组（P＜0.05）。结果表明,添加L-半胱氨酸的适宜浓度为0.9mM。实验三,在显微操作液中分别添加0mM,7mM,14mM,21mM的牛磺酸。卵裂率和囊胚发育率14mM组最高,分别为92.93%和37.68%,显著高于其他组（P＜0.05）。结果表明,14mM为显微操作液中添加牛磺酸的适宜浓度。实验四,分为四个组。对照组;维生素E组（添加100μM的维生素E）;L-半胱氨酸组（添加0.9mM的L-半胱氨酸）;牛磺酸组（添加14mM的牛磺酸）。分别测定它们对重组胚发育的影响。卵裂率,维生素E组,L-半胱氨酸组,牛磺酸组均能提高重组胚的卵裂率,显著高于对照组,这三组之间差异不显著（87.83%,85.85%,90.50%Vs 78.84%,P＜0.5）;囊胚发育率,牛磺酸鲴显著高于其他三组（38.44%,P＜0.5）,维生素E组和L-半胱氨酸组之间差异不显著,显著高于对照组。结果表明,显微操作液中添加的适宜抗氧化剂为14mM牛磺酸。实验五,在注核操作液中添加0m2d,2.5mM,5.0mM,7.5mM的咖啡因,研究不同浓度的咖啡因对重组胚发育的影响。卵裂率和囊胚发育率,5.0mM组最高,分别为91.10%和38.99%,显著高于其他组（p＜0.05）。结果表明,注核操作液中添加咖啡因的适宜浓度为5.0mM。实验六,实验分为四个组。对照组、显微操作液中添加牛磺酸组,注核操作液中添加咖啡因组、结合添加组。研究不同的显微操作液对重组胚发育的影响。卵裂率和囊胚发育率,牛磺酸组,咖啡因纽,结合添加组之间差异不显著,（88.84%,89.19%,90.92%和36.78%,36.22%,38.90%,p＞0.05）均显著高于对照组（p＜0.05）。结果表明,结合添加与分别单独添加的效果不明显。