论文摘要
研究目的：建立人脐带血来源的间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）的体外培养、扩增的方法及其影响因素，在此基础上诱导其向神经元和神经胶质样细胞分化，并对神经胶质样细胞的生物学特性进行初步的分析。 研究方法：1、细胞培养：脐血的采集由正常足月生产的胎盘脐静脉穿刺抽取。单个核细胞的分离按标准的密度梯度离心法（Ficoll-Paque）获得。所得细胞置于37℃，5％的CO2培养箱中培养，规律换液，达到80％融合后用25％胰蛋白酶—0.01％EDTA混合消化液消化以1:2的比例进行传代培养。2、生物学特性的观察：对原代传代脐血源性MSCs的生长特性进行观察比较，绘制其生长曲线。通过流式细胞仪检测扩增MSCs相关的抗原标记并与源于骨髓的MSCs的表面抗原标记相比较。3、在扩增后的MSCs中添加5％FBS，10μmol／L维甲酸，10ng／ml脑源性神经营养因子，10ng／ml睫状神经营养因子的DMEM／F12，通过免疫荧光染色和PT-PCR技术检测诱导后的细胞神经元标志物NSE、NF和神经胶质细胞标志物GFAP的表达。 研究结果：1、MSCs体外诱导培养的瓶子先予胎牛血清包被，用含低浓度胎牛血清的DMEM-LG培养基，适宜的离心力及室温，换液方法的改进均有利于纯化人脐血源性MSCs的获得。2、人脐血源性MSCs的培养生长曲线显示，随着MSCs的逐渐被纯化，各代细胞倍增速度基本稳定。3、通过流式细胞仪检测结果显示，脐血MSCs均一稳定地表达相关的抗原标记CD29、CD44、CD105，但不表达CD34、CD45、CD106和HLA-DR，这与源于骨髓的MSCs的表面抗原标记相一致。4、使用含有RA、BDNF、CNTF的诱导剂联合诱导6天后，70％左右的细胞展现出典型神经元样的细胞形态，表现为多极的、折光性增强的胞体，并可伸出较长的突起，胞质逐渐回缩，呈典型的核周形态。采用神经细胞标志物NSE、NF和GFAP的免疫荧光法对诱导后的MSCs进行鉴定，显示，诱导6天后，大多数细胞表现为NSE、
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