Ezrin在CCL5介导人乳腺癌细胞转移中的作用及其机制研究

Ezrin在CCL5介导人乳腺癌细胞转移中的作用及其机制研究

论文摘要

背景:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,乳腺癌的转移是影响患者疗效和预后并导致死亡的重要因素。肿瘤的侵袭转移是一个多步骤的复杂的、有序的过程,具有器官选择性的。与造血干细胞及淋巴细胞“归巢”类似,趋化因子在肿瘤嗜器官转移中起了重要作用。研究表明在乳腺癌高转移的器官组织中异常高表达CCL5,而乳腺癌组织高表达CCL5的受体CCR5,且与乳腺癌的恶性程度和病程相关,由此推测CCL5通过与乳腺癌细胞上相应的受体CCR5相结合而促进乳腺癌的转移。Ezrin为膜-细胞骨架连接蛋白,是ERM(Ezrin-radixin-moesin,merlin)家族成员之一,在多种恶性肿瘤中,Ezrin高表达与肿瘤发生发展及浸润转移有关,其通过改变肿瘤细胞运动、调节细胞间黏附、参与肿瘤细胞内信号转导、抑制细胞凋亡和调理吞噬细胞的吞噬功能等方面,影响恶性肿瘤的转移。本课题将研究趋化因子CCL5及其受体CCR5介导人乳腺癌细胞MCF-7的趋化与侵袭,并分析Ezrin蛋白在此过程中的重要作用及其机制。方法:1.选取人乳腺癌细胞系MCF-7作为研究材料,趋化小室检测不同浓度(0.1~100ng/ml)CCL5的作用下MCF-7细胞的侵袭活性;Western blot检测MCF-7细胞中总的Ezrin蛋白及磷酸化的Ezrin蛋白表达随CCL5趋化时间的变化;RT-PCR法测定MCF-7细胞中趋化因子CCL5受体CCR5的表达。2.采用小干扰RNA方法下调Ezrin的表达,分别通过RT-PCR法和Western blot检测siRNA对Ezrin mRNA和蛋白表达水平的下调。干扰后,再采用趋化小室检测不同浓度CCL5的作用下MCF-7细胞的侵袭活性;Western blot检测MCF-7细胞中总的Ezrin蛋白及磷酸化的Ezrin蛋白表达随CCL5趋化时间的变化。结果:1.不同浓度CCL5促进MCF-7细胞侵袭能力不同,在20ng/ml CCL5作用下,MCF-7细胞表现出侵袭活性最强,浓度过高或过低均会影响侵袭活性;在20ng/mlCCL5作用下,总的Ezrin蛋白及磷酸化的Ezrin蛋白的表达随侵袭时间的延长而明显增加;人乳腺癌细胞MCF-7表达CCL5的受体CCR5 mRNA。2.成功构建Ezrin特异的RNA干扰质粒载体,与MCF-7细胞和转染空白质粒pSUPER细胞相比,转染pSUPER-Ezrin表达载体的MCF-7细胞Ezrin mRNA和蛋白的表达明显降低。干扰后,在50ng/ml CCL5作用下,MCF-7细胞表现出侵袭活性最强,但侵袭能力均较干扰前及对照组明显下降。在20ng/ml CCL5作用下,总的Ezrin蛋白及磷酸化的Ezrin蛋白的表达随侵袭时间的延长而增加微量。结论:趋化因子CCL5促进人乳腺癌细胞MCF-7的趋化与侵袭,Ezrin蛋白的激活在此过程中起着重要的作用;成功构建Ezrin特异性siRNA表达载体,可用于探讨乳腺癌的侵袭转移机制,并为有效地抑制肿瘤的转移提供新的生物治疗靶点。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 第一部分 CCL5通过激活Ezrin增强人乳腺癌细胞MCF-7的转移能力
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第二部分 RNA干扰下调Ezrin表达抑制CCL5介导的人乳腺癌细胞MCF-7的转移
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 小结
  • 综述一 趋化性细胞因子CCL5和乳腺癌的研究进展
  • 综述二 膜-细胞骨架联接分子Ezrin在肿瘤生长和转移中的作用
  • 致谢
  • 相关论文文献

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