牛血清白蛋白脂质体的研究

论文摘要

本研究以牛血清白蛋白(BSA)作为药物模型,研究BSA脂质体的制备工艺,并对其冻干过程的工艺条件进行优化,旨在提高蛋白的稳定性、保持其活性。针对上述问题展开了以下几个方面的研究工作：首先,本课题建立了BSA脂质体包封率的测定方法,采用高速离心法分离脂质体和游离蛋白,考马斯亮蓝法测定包封率,并对其进行了方法学考察。其次,选择固体大豆卵磷脂和胆固醇为原料,无水乙醚为有机溶剂,pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液为水合介质,确定采用逆向蒸发法制备BSA脂质体的工艺流程。添加不同的保护剂对BSA脂质体进行冷冻干燥,考察了冻干产品的外观、再分散性、包封率、粒径等指标,确定了海藻糖为最佳的保护剂,且当海藻糖/磷脂(m/m)为6：1时,脂质体包封率可达67.2%。稳定性实验结果表明,BSA脂质体在4℃避光放置90天后,外观、粒径、包封率和稳定性等指标基本保持稳定。最后,采用响应面法优化BSA冻干脂质体的处方工艺。运用星点设计考察胆固醇/卵磷脂(m/m)、BSA浓度(mg/mL)和海藻糖浓度(mg/mL)三因素对BSA冻干脂质体包封率和载药量的影响及其交互作用。根据实验数据建立二次多项式回归模型,并对其进行响应面分析。BSA冻干脂质体最佳工艺条件为：胆固醇/卵磷脂(m/m)为0.25、BSA浓度为3.40mg/mL、海藻糖浓度为33.00mg/mL。该条件下BSA冻干脂质体包封率为63.10%、载药量为26.91%,平均粒径为169.4nm。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 改善口服给药策略
• 1.2.1 加入酶抑制剂
• 1.2.2 使用吸收促进剂
• 1.2.3 药物结构修饰
• 1.2.4 使用亚微粒载体系统
• 1.3 脂质体
• 1.3.1 脂质体概述
• 1.3.2 脂质体制备方法
• 1.3.2.1 机械分散法
• 1.3.2.2 薄膜法
• 1.3.2.3 逆向蒸发法
• 1.3.2.4 注入法
• 1.3.2.5 脂质前体制法
• 1.3.2.6 冷冻干燥法
• 1.3.3 脂质体的质量评价
• 1.3.3.1 形态和粒径分布的测定
• 1.3.3.2 包封率和载药量
• 1.4 脂质体作为药物载体的特点及应用
• 1.4.1 作为药物载体的特点
• 1.4.2 在蛋白类药物中的应用
• 1.5 本课题研究的意义及内容
• 第二章 包封率测定方法的建立
• 2.1 引言
• 2.2 仪器与试剂
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 牛血清白蛋白检测方法的建立
• 2.3.1.1 磷酸盐缓冲溶液的配制
• 2.3.1.2 考马斯亮蓝溶液的配制
• 2.3.1.3 吸收波长的测定
• 2.3.1.4 标准曲线的绘制
• 2.3.1.5 回收率
• 2.3.1.6 精密度
• 2.3.2 包封率测定方法的建立
• 2.3.2.1 离心时间及稀释剂的影响
• 2.3.2.2 离心转速及稀释剂的影响
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 牛血清白蛋白检测方法的建立
• 2.4.1.1 检测波长的确定
• 2.4.1.2 标准曲线的绘制
• 2.4.1.3 回收率
• 2.4.1.4 精密度
• 2.4.2 包封率测定方法的建立
• 2.4.2.1 离心时间及稀释剂的影响
• 2.4.2.2 离心转速及稀释剂的影响
• 2.4.2.3 包封率测定方法的确定
• 2.5 本章小结
• 第三章 牛血清白蛋白脂质体制备方法研究
• 3.1 引言
• 3.2 仪器与试剂
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 有机溶剂的选择
• 3.3.2 膜材的选择
• 3.3.3 胆固醇与卵磷脂质量比
• 3.3.4 BSA加量考察
• 3.3.5 水合介质的选择
• 3.4 结果和结论
• 3.4.1 有机溶剂的选择
• 3.4.2 膜材的选择
• 3.4.3 胆固醇与卵磷脂质量比
• 3.4.4 BSA加量考察
• 3.4.5 水合介质的选择
• 3.4.6 缓冲溶液浓度及pH的选择
• 3.5 本章小结
• 第四章 脂质体冻干工艺的研究
• 4.1 引言
• 4.2 仪器与试剂
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 BSA冻干脂质体的制备
• 4.3.2 BSA脂质体包封率的测定
• 4.3.3 BSA冻干脂质体的质量评价
• 4.3.3.1 外观及再分散性观察
• 4.3.3.2 包封率测定
• 4.3.3.3 粒径及其分布测定
• 4.3.3.4 BSA冻干脂质体形态测定
• 4.3.3.5 FTIR分析
• 4.3.3.6 稳定性检测
• 4.4 结果与讨论
• 4.4.1 外观及再分散性观察
• 4.4.2 包封率的测定
• 4.4.3 粒径及其分布的测定
• 4.4.4 BSA冻干脂质体形态测定
• 4.4.5 FTIR分析
• 4.4.6 稳定性检测
• 4.5 本章小结
• 第五章 响应面法优化BSA冻干脂质体处方工艺
• 5.1 引言
• 5.2 仪器与试剂
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 BSA冻干脂质体的制备
• 5.3.2 包封率和载药量的测定
• 5.3.2.1 包封率的测定
• 5.3.2.2 载药量的测定
• 5.3.3 实验设计
• 5.4 结果与讨论
• 5.4.1 响应面实验安排及结果
• 5.4.2 模型的建立及显著性检验
• 5.4.2.1 各因素对包封率的影响
• 5.4.2.2 各因素对载药量的影响
• 5.4.3 响应面优化和预测
• 5.4.3.1 显著交互作用对包封率的影响
• 5.4.3.2 显著交互作用对载药量的影响
• 5.4.4 最佳工艺条件的确定
• 5.4.5 结果验证
• 5.4.6 优化后BSA冻干脂质体质量评价
• 5.5 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间的学术成果
• 致谢