血红素加氧酶/一氧化碳系统在骨髓增生异常综合征中的表达及其造血调控作用

论文摘要

[目的]明确血红素加氧酶/一氧化碳系统（HO-CO）在骨髓增生异常综合征的表达水平及表达上调对骨髓增生异常综合征的治疗意义。[方法]选择2009年9月～2012年3月在上东大学齐鲁医院就诊的骨髓增生异常综合征患者105例（其中难治性贫血患者27例、伴环形铁粒幼细胞增多的难治性贫血患者8例、难治性血细胞减少伴多系增生异常患者26例、伴原始细胞增多的难治性贫血Ⅰ23例及伴原始细胞增多的难治性贫血Ⅱ21例）作为病例对照组；以健康人22例作为对照组。提取其骨髓单个核细胞及骨髓基质细胞并应用相应培养系统进行培养,应用半定量-聚合酶链反应测定骨髓单个核细胞对HO-1, HO-2的表达,应用蛋白免疫印迹法测定ERK1/2, JNK1/2, p38MAPK蛋白及磷酸化ERK1/2, JNK1/2, p38MAPK蛋白的表达。应用酶联免疫吸附检测法测定骨髓基质细胞培养液中GM-CSF, SCF及VEGF的含量。另外,应用不同浓度的HO-CO系统的活性上调药物血红素-左旋-赖氨酸盐处理骨髓单个核细胞及骨髓基质细胞的培养系统,然后用上述实验方法检测以上指标的表达,以观察HO-CO系统功能及表达的上调对MDS患者骨髓单个核细胞及骨髓基质细胞的相应指标的影响。实验结果数据采用SPSS统计软件进行分析,实验组与对照组比较采用t检验,实验组间比较采用单因素方差分析和q检验,方差不齐时采用t’检验。[结果]1HO-1mRNA表达水平MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD组HO-1mRNA均与正常对照组无明显差别,MDS-RAEB Ⅰ、MDS-RAEBⅡ组HO-1mRNA表达水平明显高于正常对照组。应用不同浓度的HLL干预后,MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEB Ⅱ组HO-1mRNA的表达水平明显高于相应对照组。2HO-2mRNA表达水平MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEB Ⅱ各组HO-2mRNA的表达水平与正常对照组无明显差异。应用不同浓度的HLL干预后,MDS-RA、 MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEBⅡ组HO-2mRNA的表达水平与相应对照组无明显差异。3ERK1/2蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表达水平MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD组ERK1/2蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表达水平与正常对照组无明显差异,MDS-RAEB Ⅰ、MDS-RAEB Ⅱ组ERK1/2蛋白及磷酸化ERKl/2蛋白的表达水平明显高于正常对照组。应用不同浓度的HLL干预后,MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD组在LL干预组、5nmol/4uL HLL干预组、50nmol/4uL HLL干预组及500nmol/4uL HLL干预组ERK1/2蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表达水平与相应对照组无明显差异。MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEB Ⅱ组中,500nmol/4uL HLL溶液干预组ERK1/2蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表达水平明显低于相应对照组。而LL干预组、5nmol/4uL HLL干预组、50nmol/4uL HLL干预组ERK1/2蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表达水平与相应对照组无明显差异。4JNK1/2蛋白及磷酸化JNK1/2蛋白的表达水平MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD组JNK1/2蛋白及磷酸化JNK1/2蛋白的表达水平明显低于正常对照组,MDS-RAEB Ⅰ、MDS-RAEB Ⅱ组JNK1/2蛋白及磷酸化JNK1/2蛋白的表达水平与正常对照组无明显差异。应用不同浓度的HLL干预后,MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD组中,500nmol/4uL HLL溶液干预组JNK1/2蛋白及磷酸化JNKl/2蛋白的表达水平明显高于相应对照组,而LL干预组、5nmol/4uLHLL干预组、50nmol/4uL HLL干预组JNK1/2蛋白及磷酸化JNK1/2蛋白的表达水平与相应对照组无明显差异。5p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白表达水平MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEB Ⅱ组p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白均明显高于正常对照组。应用不同浓度的HLL干预后,MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEB Ⅱ组,500nmol/4uL HLL溶液干预组p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白均明显低于相应对照组。而LL干预组、5nmol/4uL HLL干预组、50nmol/4uL HLL干预组p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK2蛋白的表达水平与相应对照组无明显差异。6caspase-3活性的表达水平MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEB Ⅱ组caspase-3活性的表达水平均明显高于正常对照组。应用不同浓度的HLL干预后,MDS-RA、 MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEB Ⅱ组,500nmol/4uL HLL溶液干预组caspase-3活性的表达水平均明显低于相应对照组。而LL干预组、5nmol/4uLHLL干预组、50nmol/4uL HLL干预组caspase-3活性的表达水平与相应对照组无明显差异。7SCF表达水平MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEBⅡ组SCF分泌水平均明显低于正常对照组。应用不同浓度的HLL干预后,在MDS-RA、MDS-RARS、 MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEB Ⅱ组中,500nmol/4uL HLL溶液干预组SCF分泌明显高于相应对照组。而LL干预组、5nmol/4uL HLL干预组、50nmol/4uLHLL干预组SCF分泌水平与相应对照组无明显差异。8GM-CSF表达水平MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEB Ⅱ组GM-CSF分泌水平均明显低于正常对照组。应用不同浓度的HLL干预后,在MDS-RA、MDS-RARS、 MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEB Ⅱ组中,500nmol/4uL HLL溶液干预组SCF, GM-CSF分泌明显高于相应对照组。而LL干预组、5nmol/4uL HLL干预组、50nmol/4uL HLL干预组GM-CSF的分泌与相应对照组无明显差异。9VEGF表达水平MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD组VEGF分泌水平与正常对照组无明显差异,而MDS-RAEBⅠ、MDS-RAEB Ⅱ组VEGF分泌水平水平明显高于相应对照组。应用不同浓度的HLL干预后,在MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEBⅡ组中,500nmol/4uL HLL溶液干预组VEGF分泌水平水平明显低于相应对照组。而LL干预组、5nmol/4uL HLL干预组、50nmol/4uL HLL干预组VEGF的分泌与相应对照组无明显差异。[结论]HO/CO系统可以通过影响多条信号通路,从而对造血调控起着重要的作用。其调控作用可以帮助MDS造血系统恢复正常有效的造血功能。HO/CO系统功能上调不仅仅对MDS患者骨髓中的正常造血细胞及造血基质细胞具有一般的细胞保护作用,还可以针对MDS骨髓正常造血细胞的过度凋亡、骨髓基质中SCF, GM-CSF的分泌减少、VEGF分泌过多等特征性的病理机制对正常造血细胞及造血基质细胞进行相应的保护。血红素-左旋-赖氨酸盐可以上调HO/CO系统的功能。在体外细胞培养状态下,500nmol/4uL的HLL溶液可以减少MDS各期患者骨髓早期造血细胞凋亡、增加骨髓基质细胞对SCF,GM-CSF的分泌,并可以抑制MDS-RAEB Ⅰ及MDS-RAEB Ⅱ患者骨髓基质中VEGF的过度分泌,对骨髓增生异常综合征具有治疗价值。

论文目录

• 摘要
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• 符号说明
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• 结果
• 讨论
• 结论
• 附表
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