导读:本文包含了削减文库论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:滴度,重组率,差异杂交,PCR
削减文库论文文献综述
李迅,邵蔚蓝[1]（2005）在《草菇cDNA削减文库的构建》一文中研究指出介绍一种改进的利用差异杂交和定向插入构建全长cDNA削减文库的方法.分别以诱导和非诱导条件培养草菇菌丝,两者都提取总RNA并采用PolyATtract mRNA Isolation System III试剂盒快速提取mRNA,由PowerScriptTMReverse Transcriptase将诱导菌丝提取的mRNA进一步逆转录成cDNA第一链,用得到的cDNA第一链和非诱导菌丝提取的mRNA进行杂交,将未杂交上的cDNA第一链洗脱浓缩后,用SMARTTMcDNA L ibraryConstruction试剂盒构建成草菇cDNA削减文库.经检测:原始文库滴度为2.5×105pfu/mL,重组率为93%,插入cDNA大小在0.5~4.0 kb之间,文库扩增后,文库滴度为1.1×109pfu/mL,并从中克隆到了若干植物纤维降解酶.结果表明其简化了实验步骤,而且更有利于富集所需全长基因,是构建cDNA文库的一种有效改进.(本文来源于《南京师大学报(自然科学版)》期刊2005年04期）
李迅[2]（2005）在《草菇cDNA削减文库的构建及叁种多聚糖降解酶基因的克隆与表达》一文中研究指出食用菌能够利用废弃的木质纤维素类物质作为生长基质,通过生物转化将其转变为具有较高附加值的食品或药用子实体。草菇(Volvariella volvacea)主要生长在热带和亚热带地区,是世界第五大食用菌培育品种。它以稻草等秸秆为生长基质,生长温度比其它中温真菌高,这些特性显示其纤维降解酶系可能具有更好的温度稳定性。本文的研究内容是构建草菇cDNA削减文库,为建立高等担子菌基因高效表达体系提供有力的基因工程方面的支持;克隆一些有价值的多糖降解酶,并对它们的外源表达进行探讨。1.首先确定草菇中半纤维素酶和纤维素酶最佳mRNA丰度的诱导条件为:xylan和CMC各0.2%;(NH_4)_2SO_4 0.2%;KH_2PO_4 0.2%;VB1 2.5 mg/L;MgSO_4 0.1%;pH 7.5;150 rpm的转速培养。改进了担子菌草菇的总RNA抽提方法,用此方法获得的RNA满足了后继的cDNA合成需要。介绍一种改进的利用差异杂交和定向插入的方法构建全长cDNA削减文库,分别以诱导和非诱导条件培养草菇菌丝,两者都提取mRNA,由PowerScript~(TM)逆转录酶将诱导菌丝提取的mRNA逆转录成cDNA第一链,用得到的cDNA第一链和非诱导菌丝提取的过量mRNA进行杂交,将未杂交上的cDNA第一链洗脱浓缩后,用SMART~(TM) cDNA Library Construction试剂盒构建成草菇cDNA削减文库。经检测:原始文库滴度为2.5×10~5 pfu/ml,重组率为93%,插入cDNA大小在0.5～4.0 kb之间,文库扩增后,文库滴度为1.1×10~9 pfu/ml。2.首次发现草菇中木聚糖酶基因的mRNA大规模异常剪辑现象,发生了内含子错读或外显子错误剪辑,形成不正常的mRNA。这可能是草菇适应环境一种调节方式,来满足(本文来源于《江南大学》期刊2005-05-01）
宋天强,李强,郝希山[3]（2004）在《正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库的构建及差异基因的初步筛选》一文中研究指出目的 构建人正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库。方法 采用抑制削减杂交技术,以正常肝组织及有肝癌背景的肝硬化组织作为对比材料。分离出mRNA,经反转录后,通过两轮杂交、两次PCR和T/A克隆构建了两种组织间差异表达基因的cDNA削减文库。结果 挑取70个克隆进行酶切和PCR鉴定,显示65个克隆有250-2000 bp插入片段。结论 用SSH和T/A克隆技术成功构建了正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库。该文库的建立为进一步筛选、鉴定出肝癌发生过程中的相关调控基因奠定了基础,也有助于阐明肝硬化在肝癌发生过程中所起的作用。(本文来源于《中国肿瘤临床与康复》期刊2004年01期）
田增遂,琦祖和,薛越强[4]（2002）在《人载脂蛋白E7转基因小鼠肾脏cDNA削减文库与cDNA文库》一文中研究指出目的 以人apoE7基因制备的高脂血症转基因小鼠模型已建成 ,要用于探查这一突变基因致病的分子机制 ,首先揭示人apoE7在小鼠体内诱发了那些基因的表达异常 ,是重要的环节之一。cDNA削减文库是寻找异常高表达的已知和未知基因有效的手段 ,而cDNA文库更是获取全长基因所必须。方法 自正常小鼠与转基因小鼠肾脏同时提取总RNA ,再分离mRNA ,逆转录制备cDNA后 ,用两次分子杂交削除转基因鼠cDNA中与正常小鼠相同的部分 ,再用PCR与择需PCR法扩增转基因鼠特异的基因 ,克隆入pGEM T载体后 ,制备削减文库。未经削减的转基因小鼠cDNA克隆入λgt11载体 ,制备基因表达文库。结果和结论 自高脂血症转基因小鼠肾脏构建的削减文库得到约 4 0 0个削减克隆 ,测定了部分克隆的序列 ,并进行同源性比较。λgt11 cDNA文库滴度 1 7× 10 7pfu ml,随机测定的克隆其插入片段长约 5 0 0bp以上。(本文来源于《中国实验动物学报》期刊2002年02期）
削减文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
食用菌能够利用废弃的木质纤维素类物质作为生长基质,通过生物转化将其转变为具有较高附加值的食品或药用子实体。草菇(Volvariella volvacea)主要生长在热带和亚热带地区,是世界第五大食用菌培育品种。它以稻草等秸秆为生长基质,生长温度比其它中温真菌高,这些特性显示其纤维降解酶系可能具有更好的温度稳定性。本文的研究内容是构建草菇cDNA削减文库,为建立高等担子菌基因高效表达体系提供有力的基因工程方面的支持;克隆一些有价值的多糖降解酶,并对它们的外源表达进行探讨。1.首先确定草菇中半纤维素酶和纤维素酶最佳mRNA丰度的诱导条件为:xylan和CMC各0.2%;(NH_4)_2SO_4 0.2%;KH_2PO_4 0.2%;VB1 2.5 mg/L;MgSO_4 0.1%;pH 7.5;150 rpm的转速培养。改进了担子菌草菇的总RNA抽提方法,用此方法获得的RNA满足了后继的cDNA合成需要。介绍一种改进的利用差异杂交和定向插入的方法构建全长cDNA削减文库,分别以诱导和非诱导条件培养草菇菌丝,两者都提取mRNA,由PowerScript~(TM)逆转录酶将诱导菌丝提取的mRNA逆转录成cDNA第一链,用得到的cDNA第一链和非诱导菌丝提取的过量mRNA进行杂交,将未杂交上的cDNA第一链洗脱浓缩后,用SMART~(TM) cDNA Library Construction试剂盒构建成草菇cDNA削减文库。经检测:原始文库滴度为2.5×10~5 pfu/ml,重组率为93%,插入cDNA大小在0.5～4.0 kb之间,文库扩增后,文库滴度为1.1×10~9 pfu/ml。2.首次发现草菇中木聚糖酶基因的mRNA大规模异常剪辑现象,发生了内含子错读或外显子错误剪辑,形成不正常的mRNA。这可能是草菇适应环境一种调节方式,来满足
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
削减文库论文参考文献
[1].李迅,邵蔚蓝.草菇cDNA削减文库的构建[J].南京师大学报(自然科学版).2005
[2].李迅.草菇cDNA削减文库的构建及叁种多聚糖降解酶基因的克隆与表达[D].江南大学.2005
[3].宋天强,李强,郝希山.正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库的构建及差异基因的初步筛选[J].中国肿瘤临床与康复.2004
[4].田增遂,琦祖和,薛越强.人载脂蛋白E7转基因小鼠肾脏cDNA削减文库与cDNA文库[J].中国实验动物学报.2002