退变人髓核细胞体外培养及对TGF-β1和IGF-1干预的反应性研究

论文题目: 退变人髓核细胞体外培养及对TGF-β1和IGF-1干预的反应性研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 外科学

作者: 王磊

导师: 吴小涛

关键词: 椎间盘退变,髓核细胞,细胞培养,经皮的

文献来源: 东南大学

发表年度: 2005

论文摘要: 背景介绍:下腰痛发病率较高,并造成巨大的社会经济损失,大约有75%到80%的人一生中发生过下腰痛,椎间盘退变(DDD)是其主要原因。现在的治疗方法有保守治疗和手术治疗,主要针对的是患者的临床症状,而不是针对疾病的病理过程。随着分子生物学技术的发展,在细胞水平治疗DDD有望成为现实。DDD的病因学和病理生理学尚不十分清楚。已知正常髓核中富含蛋白多糖和Ⅱ型胶原,纤维环富含I型胶原。早期DDD由髓核中蛋白多糖减少引起。在生物化学水平,蛋白多糖减少反应了髓核细胞合成和分解代谢的失衡,随着基质中蛋白多糖减少,髓核脱水、高度降低使椎间盘承载能力下降,从而影响脊柱的生物力学性能。虽然DDD包含了很多生物化学和生物力学因素,但通过治疗来增加蛋白多糖含量,从而增加其含水量及生物力学性能是有潜在治疗效果的。1991年Thompson等发现胰岛素样生长因子(1GF-1)、表皮样生长因子(EGF)、转化生长因子-p(TGF—p1)能使体外培养的犬椎间盘细胞增加蛋白多糖的合成,并提出用生长因子治疗DDD。实验目的:⑴经皮穿刺抽吸术诱发兔椎间盘变性,验证椎间盘结构缺失导致椎间盘退变的理论。⑵找出分离退变髓核细胞的简单易行的办法⑶观察在体外培养条件下,退变髓核细胞的生长情况。⑷观察TGF-β1和IGF-1对髓核细胞的生物学活性影响方法:本实验首先将兔椎间盘进行穿刺抽吸使其变性,2周后采用胰酶+胶原酶联合消化法分离该椎间盘的髓核细胞,分离所获细胞用DMEM/F12混合培养基进行单层培养。台盼蓝染色测定活力,观察细胞倍增时间。人退变髓核细胞分离后同上述培养,台盼蓝染色测定活力,观察其生长状况,记录细胞数目倍增时间,用免疫组化和考马斯亮蓝测定法观察细胞在生长因子干预下合成Ⅱ型胶原能力的改变。结果:兔变性髓核细胞和正常髓核细胞倍增时间相同,髓核细胞体外传代后活力下降。人髓核细胞台盼蓝染色测定活力在90%～95%,传代后活力减弱。加入TGF-β1和IGF-1干预,细胞合成Ⅱ型胶原含量增加,联合使用效果更加明显。TGF-β1和IGF-1干预细胞活性具有时间依赖性。结论:⑴经皮穿刺抽吸术可以造成兔椎间盘变性,验证了椎间盘结构缺失导致椎间盘退变的理论⑵胰酶+胶原酶联合消化法,能够在短时间内得到高活率细胞,胶原酶的联合使用,可以更好的解释退变椎间盘组织中胶原成分的改变。⑶证明一定浓度的TGF-β1和IGF-1在短期内能够部分改善退变的髓核细胞的生物学活性,两种药物合用效果更为显著,同时该两种药物对髓核细胞的作用呈时间依赖性。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

第一章：文献综述椎间盘退变机制及治疗研究进展

一. 椎间盘退变的发生机制

二. 椎间盘退变治疗的研究进展

第二章 兔椎间盘变性模型建立和髓核细胞培养

第一部分 材料与方法

第二部分 实验结果

第三章 人退变髓核细胞体外培养及生物活性研究

第一部分 材料与方法

第二部分 实验结果

第四章 讨论

一 椎间盘退变与髓核细胞关系:

二 椎间盘组织结构与髓核细胞外基质: 一个完整的椎间盘结构可分为:髓核、

三 体外培养髓核细胞的意义:

四 体外培养细胞样本的选择:

五 髓核细胞分离技术

六 髓核细胞体外培养:

七 使用TGF-β1,IGF意义

八 兔椎间盘退变模型的建立

总 结

致谢

参考文献

英文缩略词表

作者简介

发布时间: 2007-06-11

参考文献

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