Epstein-Barr病毒在Burkitt淋巴瘤细胞（Raji）染色体上整合的初步研究

论文摘要

自1964年Epstein和Barr在Burkitt淋巴瘤标本的体外传代细胞中发现Epstein-Barr病毒（EBV）以来，已有多种肿瘤被证实与EBV感染有关，其中尤以Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌与EBV的关系最为密切。在EBV溶解性感染的细胞里EBV DNA呈线状形式，而在潜伏性感染时，EBV DNA通过基因组末端连接而环化，以游离体形式存在。绝大多数Burkitt淋巴瘤和鼻咽癌可检测出以游离体形式存在的EBV DNA，这代表着EBV的持续性潜伏感染。EBV DNA可整合至细胞染色体，这是EBV持续潜伏感染的另一种方式，代表了病毒一细胞相互作用的又一种机制。EBV DNA与细胞基因组DNA整合后引起细胞染色体的不稳定性，整合的EBV DNA可导致一些与细胞生长、肿瘤形成有关的重要基因表达异常，促进细胞恶性转化。 Raji细胞是一种Burkitt淋巴瘤细胞，由Pulvertaft于1963年建株，是研究EB病毒致癌机制最为常用的细胞系之一。每个Raji

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩写词简表
• 前言
• 实验技术路线图
• 第一部分：PCR、Southern Blot检测EBV DNA
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 研究对象
• 1.1.2 主要实验试剂
• 1.1.3 主要实验仪器
• 1.1.4 实验方法
• 1.1.4.1 基因组DNA抽提
• 1.1.4.2 探针的制备
• 1.1.4.3 探针的标记与纯化
• 1.1.4.4 PCR检测EBV DNA
• 1.1.4.5 Southern blot
• 1.2 结果
• 1.2.1 两种EBV DNA探针的鉴定
• 1.2.2 PCR检测EBV DNA
• 1.2.3 Southern blot检测EBV DNA
• 第二部分 Raji细胞中EBV整合的染色体定位
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 细胞株
• 2.1.2 主要实验试剂
• 2.1.3 主要实验仪器
• 2.1.4 实验方法
• 2.1.4.1 细胞分裂中期染色体的制备
• 2.1.4.2 Raji细胞中期染色体G带玻片标本制备
• 2.1.4.3 探针的标记和纯化
• 2.1.4.4 杂交
• 2.1.4.5 杂交后洗脱
• 2.1.4.6 信号倍增
• 2.1.4.7 结果观察
• 2.1.4.8 实验过程中注意事项
• 2.2 结果
• 第三部分 Raji细胞／鼻咽癌组织基因组文库的构建与筛选
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 研究对象
• 3.1.2 主要实验试剂
• 3.1.3 主要实验仪器
• 3.1.4 实验方法
• 3.1.4.1 基因组DNA抽提
• 3.1.4.2 Southern blot
• 3.1.4.3 基因组文库的构建
• 3.1.4.4 原始文库滴度的测定
• 3.1.4.5 文库的扩增及扩增文库滴度测定
• 3.1.4.6 基因组文库的筛选
• 3.1.4.7 噬菌体阳性克隆的快速分析
• 3.1.4.8 以阳性克隆为模板扩增目的片段
• 3.2 结果
• 3.2.1 Probe-L2的PCR扩增
• 3.2.2 Southern blot
• 3.2.3 基因组DNA酶切及纯化
• 3.2.4 Raji原始文库和扩增文库的滴度测定
• 3.2.5 Raji基因组文库的筛选
• 3.2.6 目的片段的扩增及序列分析
• 讨论
• 一、EBV的亲淋巴细胞性和亲上皮细胞性感染
• 二、研究病毒DNA整合的方法学
• 三、EBV DNA在Raji细胞中的表达
• 四、基于Lambda DASH Ⅱ载体的基因组文库构建及筛选
• 五、尚需继续深入研究的课题
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 附件：已接受的SCI论文
• 致谢
• 个人简历