论文摘要
目的：本实验模拟高蛋白饮食后体内氨基酸水平，从细胞水平观察高浓度混合氨基酸以及单一高浓度甘氨酸、赖氨酸对肾小管上皮细胞增殖，分泌转化生长因子-β1（TGF-β1）和表达血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）的影响。方法：实验分四组：对照组（含5％血清的RPMI-1640培养液）；高浓度混合氨基酸组（每种氨基酸的水平高于1640培养液1.5-6倍，含5％血清）；高浓度甘氨酸培养液组（仅甘氨酸浓度较1640培养液升高，含5％血清）；高浓度赖氨酸培养液组（仅赖氨酸浓度较1640培养液升高，含5％血清）。采用对数生长期的人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）加入含不同浓度氨基酸的培养液分别孵育12小时、24小时、36小时、48小时。用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞的增殖能力，观察不同类型的培养液在不同作用时间对HK-2细胞增殖的影响；选取刺激增殖作用最明显的时间，以酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清液中TGF-β1的浓度，用细胞免疫化学染色检测HK-2细胞表达AT1R的情况。采用SPSS 13.00统计软件对数据进行统计学分析。数值表达用均数±标准差（（?）±s），统计分析采用方差分析（S-N-K检验），P＜0.05为差异有显著。结果：1．MTT实验显示高浓度混合氨基酸组、甘氨酸组、赖氨酸组均能刺激HK-2增殖，各组和对照组比较吸光度都有增加（p＜0.05）；各组的促增殖作用在24小时出现，36小时促增殖率最大，48小时有所下降；混合氨基酸组和另外两个实验组对比促增殖作用较强，吸光度较高（p＜0.05）；甘氨酸和赖氨酸组对比两组数据无差别，促增殖作用相似（p＞0.05）。2．ELISA结果显示高浓度混合氨基酸干预的细胞上清液中TGF-β1浓度明显升高，和对照组相比有统计学意义（p＜0.05）；甘氨酸组和赖氨酸组上清液中TGF-β1浓度和对照组相比无差别（p＞0.05）。3．细胞免疫化学结果显示高浓度混合氨基酸干预后HK-2表达AT1R增强，和对照组相比染色明显加深，平均积分光密度升高，甘氨酸组和赖氨酸组细胞表达AT1R和对照组相比无差别（p＞0.05）。结论：1．高浓度混合氨基酸、高浓度甘氨酸、高浓度赖氨酸促进肾小管上皮细胞增殖，在24小时出现，36小时达高峰，随时间增加促增殖作用略有下降。混合氨基酸促增殖作用明显较强，甘氨酸和赖氨酸促增殖作用相似；2．高浓度混合氨基酸促进肾小管上皮细胞分泌TGF-β1增多，高浓度甘氨酸、高浓度赖氨酸无此作用；3．高浓度混合氨基酸促进肾小管上皮细胞表达AT1R上调，高浓度甘氨酸、高浓度赖氨酸无此作用。