刺参Apostichopus japonicus耐高温品系选育的基础研究

论文摘要

刺参是目前支撑我国海水增养殖业高效、稳定、持续发展的重要物种之一，但该产业面临着种质匮乏、病害严重、养殖环境局部恶化和产品品质难以保证等诸多问题。本文围绕刺参增养殖过程中的种质苗种问题，以培育耐高温品系为研究目标，在评价我国沿海不同地理群体刺参及其子一代在热刺激条件下HSP70基因mRNA表达差异的基础上，以低纬度地理群体为亲本，经温度刺激后比较了幼体及幼参的生长及HSP70 mRNA表达差异，获得了性状优良的耐高温群体。主要研究结果如下：1、研究了我国沿海刺参不同地理群体在热激后HSP70基因mRNA的表达差异，比较了在不同温度下不同地理群体幼参的生长特性。青岛、日照和养殖等低纬度群体成参HSP70基因mRNA表达变化较大连、长岛等高纬度群体明显；热激后低纬度群体幼参HSP70基因mRNA表达量较高纬度群体高；高温条件下，高纬度群体子一代成活率低生长。温度升高对高纬度群体生长的影响较大。2、利用荧光实时定量PCR检测了HSP70基因在不同组织、不同温度、不同时间mRNA水平的表达差异。刺参的各组织都有HSP70的mRNA表达，且对热刺激都有应答。自然水温12℃时，在＋12℃温度刺激时刺参的呼吸树中的HSP70 mRNA水平较高；刺参成参、幼参呼吸树中HSP70基因的mRNA水平在热激后6-12h达到最高；低温刺激后HSP70 mRNA下调表达。3、分别从受精卵和初耳幼体开始在不同温度下进行幼体培育，27℃以上温度培育的刺参幼体，其生长和成活率显著低于24℃以下温度培育的幼体；不同起始刺激阶段和不同温度都是显著影响因子。从初耳幼体进行高温培育，幼体的变态受到明显影响，26℃以上温度培育幼体的变态率显著低于24℃以下培育温度。4、以日照刺参为亲本，在26℃培育温度下获得了耐高温群体幼参，并从生长、HSP70mRNA水平的表达差异与常温培育的群体（普通群体）进行了比较。耐高温群体幼参在较高温度下成活率和HSP70mRNA表达水平明显高于普通群体，而二者在特定生长率随温度变化上没有差异。5、在浙江苍南进行了选择群体耐高温能力和生长验证实验。耐温群体的温度耐受能力提高了0.7℃，进入夏眠时间延后15d左右。耐温刺参群体的特定生长率和成活率在3月温度回升后远高于对照组。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 刺参增养殖现状及热休克蛋白研究进展
• 1.1 刺参增养殖现状及遗传育种研究进展
• 1.2 温度对刺参的影响
• 1.3 热休克蛋白研究进展
• 1.4 本研究拟解决的问题及技术路线
• 本章小结
• 2 材料及方法
• 2.1 刺参苗种培育与养成方法
• 2.2 热休克蛋白70 实验方法及原理
• 3 刺参热休克蛋白70基因的表达
• 3.1 材料与方法
• 3.2 刺参HSP70基因和β-actin基因的克隆
• 3.3 荧光实时定量PCR检测热激后HSP70基因的组织及时序表达差异
• 3.4 讨论
• 本章小结
• 4 不同地理群体刺参HSP70基因的表达差异及生长的对比
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 本章小结
• 5 温度对刺参受精卵孵化和幼体生长的影响
• 5.1 材料与方法
• 5.2 结果
• 5.3 讨论
• 本章小结
• 6 温度选择刺参群体的耐高温测验
• 6.1 材料与方法
• 6.2 结果
• 6.3 讨论
• 本章小结
• 结论与建议
• 参考文献
• 博士期间文章撰写与发表情况
• 致谢