论文摘要
石杉碱甲（Huperzine A）是从蛇足石杉Huperzia serrata中分离得到的一种新型石杉类生物碱有效单体，是高效、高选择性、可逆的乙酰胆碱酯酶抑制剂，其作用时间长、易透过血-脑脊液屏障、口服生物利用度高。目前临床试验已证明，石杉碱甲能显著提高老年人、阿尔茨海默症（Alzheimer’s Disease，AD）、血管性痴呆（vascular dementia，VD）患者的记忆力，且外周不良反应轻微。本文用电位滴定法测定了石杉碱甲的解离常数，并采用液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）法对石杉碱甲片在人体内的药代动力学及生物等效性进行了研究。一．石杉碱甲解离常数的测定本文采用电位滴定法测定石杉碱甲的解离常数，0．002 mol·L-1的样品水溶液用0．01 mol·L-1的盐酸滴定液滴定，实验数据用三种方法处理：1．非对数滴定法（Benet法），测得pKa1=7．702．分段线性回归法，测得pKa1=7．51，pKa2=3．203．加质子形成函数法（nH），测得pKa1=7．53，pKa2=2．71二．石杉碱甲片在人体内的药代动力学研究本文建立了准确、灵敏的LC-MS-MS法测定石杉碱甲在血浆中的浓度，以研究石杉碱甲片在人体内的药代动力学和生物等效性。本法以盐酸伪麻黄碱为内标，血浆样品由0．1 mol·L-1的氢氧化钠溶液碱化后，经乙酸乙酯提取，干燥氮气流吹干浓缩；以0．2％甲酸水溶液-甲醇（15：85）为流动相，采用Lichrospher C18柱分离，通过电喷雾离子化，串联四级杆质谱正离子选择性离子反应（SRM）进行测定。用于定量分析的离子反应分别为[M+H]+m／z 243@22eV→m／z226（石杉碱甲），[M+H]+m／z 166@12eV→m／z 148（伪麻黄碱）。该方法在0．0508-5．08 ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0．9998）。高、中、低三种浓度样品绝对回收率均大于70％，批内批间精密度良好RSD<15％。对18例健康男性志愿受试者进行双周期双交叉试验，随机单剂量口服石杉碱甲（0．2 mg）受试制剂或参比制剂后，用LC-MS-MS法测定血浆中石杉碱甲的浓度，测得受试制剂与参比制剂药代动力学参数AUC0-t，AUC0-∞，Cmax，Tmax和t1／2分别为(16．35±3．42 ng·h·mL-1和16．38±3．61 ng·h·mL-1)，(17．53±3．80 ng·h·mL-1和17．70±3．97ng·h·mL-1)，(2．47±0．49 ng·mL-1和2．51±0．51 ng·mL-1)，（1．3±0．4h和1．2±0．3 h）和（5．92±0．75 h和6．18±0．66 h），相对生物利用度（F）为（100．5±10．1）％。对参数AUC、Cmax进行双单侧t检验，结果表明该参数生物等效，Tmax经非参数法检验无显著性差异（P>0．05），这表明石杉碱甲受试制剂和参比制剂生物等效。