本文主要研究内容
作者许杰（2019）在《Shh信号在牙釉质发育早期功能的研究》一文中研究指出：Shh信号在胚胎发育中发挥重要作用,它是脊椎动物牙齿发育的标记物,调控口腔上皮-间充质的信号转导,同时促进早期牙胚的形态发生,并影响牙胚的细胞周期调控和分化,但Shh信号在牙釉质发育早期调控机制目前还不清楚。我们通过原位杂交实验发现Shh信号及其通路分子在刚出生小鼠的成釉质细胞中均有表达,但随着成釉质细胞进入分泌期,其表达逐渐降低并消失,表明Shh信号可能在分泌前的成釉质细胞中有作用。为了准确定义Shh信号在釉质发生过程中的功能,我们构建了由成釉质细胞特异的Amelx基因启动子驱动的、可诱导表达的Amelx-ERCreER小鼠,我们利用该小鼠在分泌前期的成釉质细胞中敲除Shh或Smo基因,都发现了釉质发育不全的表型。据此,我们推测Shh信号可能参与釉基质蛋白的合成或分泌。通过原位杂交和Q-PCR结果分析发现,在分泌前的成釉质细胞中敲除Shh基因会导致釉基质蛋白Amelogenin(Amelx),Ameloblastin(Ambn)和Enamelin(Enam)基因表达显著下调,而且免疫荧光及Western blot实验都发现了釉基质蛋白显著减少,我们又通过体外器官培养,利用Shh重组蛋白激活Shh信号通路,Q-PCR实验结果显示Amelx,Ambn,Enam基因表达上调,以上结果表明Shh信号可能直接参与釉基质蛋白基因表达调控。为了验证我们的推测,我们利用成釉质细胞系ALC细胞,以及P2天野生型小鼠的磨牙上皮进行了ChIP分析,结果发现Gli1,Gli2,Gli3与Amelx,Ambn,Enam的启动子区域均有直接结合,其中Gli2的结合能力最强。为了确定Gli蛋白与Enam启动子的结合区域是否与我们预测的一致,我们又进行了Luciferase实验,结果显示,Gli与Enam启动子结合区域位于-600bp~-1200bp。以上结果表明Shh信号主要是通过Gli直接调控釉基质蛋白基因的表达来参与釉质发生。
Abstract
Shhxin hao zai pei tai fa yo zhong fa hui chong yao zuo yong ,ta shi ji chui dong wu ya chi fa yo de biao ji wu ,diao kong kou qiang shang pi -jian chong zhi de xin hao zhuai dao ,tong shi cu jin zao ji ya pei de xing tai fa sheng ,bing ying xiang ya pei de xi bao zhou ji diao kong he fen hua ,dan Shhxin hao zai ya you zhi fa yo zao ji diao kong ji zhi mu qian hai bu qing chu 。wo men tong guo yuan wei za jiao shi yan fa xian Shhxin hao ji ji tong lu fen zi zai gang chu sheng xiao shu de cheng you zhi xi bao zhong jun you biao da ,dan sui zhao cheng you zhi xi bao jin ru fen bi ji ,ji biao da zhu jian jiang di bing xiao shi ,biao ming Shhxin hao ke neng zai fen bi qian de cheng you zhi xi bao zhong you zuo yong 。wei le zhun que ding yi Shhxin hao zai you zhi fa sheng guo cheng zhong de gong neng ,wo men gou jian le you cheng you zhi xi bao te yi de Amelxji yin qi dong zi qu dong de 、ke you dao biao da de Amelx-ERCreERxiao shu ,wo men li yong gai xiao shu zai fen bi qian ji de cheng you zhi xi bao zhong qiao chu Shhhuo Smoji yin ,dou fa xian le you zhi fa yo bu quan de biao xing 。ju ci ,wo men tui ce Shhxin hao ke neng can yu you ji zhi dan bai de ge cheng huo fen bi 。tong guo yuan wei za jiao he Q-PCRjie guo fen xi fa xian ,zai fen bi qian de cheng you zhi xi bao zhong qiao chu Shhji yin hui dao zhi you ji zhi dan bai Amelogenin(Amelx),Ameloblastin(Ambn)he Enamelin(Enam)ji yin biao da xian zhe xia diao ,er ju mian yi ying guang ji Western blotshi yan dou fa xian le you ji zhi dan bai xian zhe jian shao ,wo men you tong guo ti wai qi guan pei yang ,li yong Shhchong zu dan bai ji huo Shhxin hao tong lu ,Q-PCRshi yan jie guo xian shi Amelx,Ambn,Enamji yin biao da shang diao ,yi shang jie guo biao ming Shhxin hao ke neng zhi jie can yu you ji zhi dan bai ji yin biao da diao kong 。wei le yan zheng wo men de tui ce ,wo men li yong cheng you zhi xi bao ji ALCxi bao ,yi ji P2tian ye sheng xing xiao shu de mo ya shang pi jin hang le ChIPfen xi ,jie guo fa xian Gli1,Gli2,Gli3yu Amelx,Ambn,Enamde qi dong zi ou yu jun you zhi jie jie ge ,ji zhong Gli2de jie ge neng li zui jiang 。wei le que ding Glidan bai yu Enamqi dong zi de jie ge ou yu shi fou yu wo men yu ce de yi zhi ,wo men you jin hang le Luciferaseshi yan ,jie guo xian shi ,Gliyu Enamqi dong zi jie ge ou yu wei yu -600bp~-1200bp。yi shang jie guo biao ming Shhxin hao zhu yao shi tong guo Glizhi jie diao kong you ji zhi dan bai ji yin de biao da lai can yu you zhi fa sheng 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自杭州师范大学的许杰，发表于刊物杭州师范大学2019-10-16论文，是一篇关于信号论文,牙釉质发育不全论文,釉基质蛋白论文,杭州师范大学2019-10-16论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自杭州师范大学2019-10-16论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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