卵巢癌C-erbB2基因表达及T7-ShRNAs对SKOV3细胞的RNAi作用

卵巢癌C-erbB2基因表达及T7-ShRNAs对SKOV3细胞的RNAi作用

论文摘要

C-erbB2又称neu基因,是1985年确认的v-erbB2相关的原癌基因,与表皮生长因子受体因子(EGFR)十分近似,其过度表达与人类肿瘤的发生有关。利用我科是重点学科,卵巢恶性肿瘤患者多的优势,紧密结合临床查阅了大量卵巢癌患者病历,做了C-erbB2表达的免疫组化研究,研究证实在不同组织分化来源中的卵巢癌中存在C-erbB2基因不同程度的高表达,提示C-erbB2家族在恶性肿瘤的发生与发展过程中起重要的作用,通过随访发现还和预后不良也密切相关。同时还培养了人SKOV3卵巢癌细胞株细胞,根据检索到的基因序列确定了3处靶位点,应用RNAi技术对所培养的细胞进行尝试性的干涉实验;结果表明。转染SKOV3细胞后,其中一条发夹链高效特异地干涉了SKOV3细胞中C-erbB2的表达;RT-PCR、Western blot及细胞生长曲线的结果也与之相符,CCK-8观察卡铂与RNA干涉联合应用取得了明显的抑制效果。从免疫组化、细胞生物到分子生物学,为研究卵巢上皮性癌发病机制和进行基因治疗奠定了基础。

论文目录

  • 英文缩写词表
  • 第一部分 前言
  • 第一章 关于C-ER882 基因
  • 第二章 C-ER882 基因过度表达与卵巢癌研究现状
  • 第三章 RNAI 现状及研究进展
  • 第二部分 C-ER882 基因(过度)表达与卵巢免疫组化研究
  • 材料与方法
  • 一、实验材料
  • 二、实验方法
  • 结果与分析
  • 一、卵巢组织中C-e1682 基因过度表达的免疫组化研究
  • 二、C-e1682 基因表达与卵巢恶性肿瘤患者预后的关系
  • 讨论
  • 第三部分 T7-shRNAs 对SKOV3 卵巢癌细胞株细胞中C-erbB2表达的干涉作用
  • 一、体外转录法合成siRNA
  • 二、细胞转染
  • 三、半定量的RT-PCR
  • 四、蛋白质免疫印记杂交(Western -Blot)
  • 五、CCK-8 细胞生长抑制情况测定
  • 结果与分析
  • 一、体外转录实验结果
  • 二、SK-OV3 细胞转染shRNA 后结果
  • 三、半定量的RT-PCR 结果
  • 四、Western Blot 结果
  • 五、细胞生长抑制
  • 讨论
  • 结论
  • 课题创新性总结
  • 参考文献
  • 攻读博士期间发表的学术论文
  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 致谢
  • 相关论文文献

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