次氯酸荧光蛋白探针

论文摘要

活性氧在维持机体正常生理机能方面起着非常重要的作用。ROS种类多样性决定了它多样化的生物化学活性。它们可对蛋白、核酸、脂肪类等生物大分子进行多元化修饰。机体对自身体内的ROS具有非常严格复杂的调控机制,ROS浓度过高或过低导致细胞内氧化还原状态失衡,容易引发多种疾病。所以能够灵敏、实时、原位地监控细胞内甚至活体内HOCl对深入研究各种相关疾病的治疗、药物开发尤为重要。本论文利用分子生物学手段对绿色荧光蛋白进行基因定向和非定向的突变、环状重排及缺失,获得一系列的绿色荧光蛋白突变体,并建立多种ROS检测体系来筛选这些绿色荧光蛋白突变体,最终筛选出了一种对次氯酸特异性较好、灵敏度较高的荧光蛋白探针,并可应用于细菌及细胞的HOCl检测。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 活性氧的生理学意义
• 1.1.1 活性氧的产生
• 1.1.2 活性氧的功能
• 1.2 活性氧的检测方法
• 1.2.1 过氧亚硝酸根研究进展
• 1.2.2 次氯酸研究进展
• 1.2.3 其他活性氧探针研究进展
• 1.3 荧光蛋白研究进展
• 1.3.1 荧光蛋白发展概况
• 1.3.2 荧光蛋白应用前景
• 1.4 展望
• 第二章 活性氧探针筛选
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌株
• 2.1.2 质粒
• 2.1.3 酶和试剂
• 2.1.4 实验仪器
• 2.1.5 溶液配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 实验流程图
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 实验结果与讨论
• 2.3.1 ROS检测方法建立
• 2.3.2 SFGFP定点突变质粒构建、表达与检测
• 2.3.3 SFGFP突变体的表达、纯化与检测
• 2.3.4 HOCl探针活菌检测
• 2.3.5 探针性质研究
• 2.4 讨论
• 2.4.1 实验原理
• 2.4.2 SFGFP定向突变结果讨论
• 2.4.3 CP4 ROS检测结果讨论
• 2.4.4 突变质粒构建碱基缺失解决办法
• 第三章 结论
• 参考文献
• 致谢