扇贝性腺多糖复合物的提取分离纯化及活性研究

论文摘要

本文从扇贝性腺中提取多糖和糖蛋白,并对其进行分离纯化,考察其抗氧化、抗肿瘤、抗凝血和免疫等生物活性,为扇贝功能产品的开发奠定基础。首先,采用酶解醇沉法制备扇贝性腺粗多糖（CSGP）,经DEAE-52阴离子交换柱分离纯化后,得到3个组分SGP1、SGP2和SGP3。采用Sepharose CL-6B测定SGP2和SGP3分子量分别为270 kDa和8kkDa。CSGP具有一定的DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力及还原能力。进一步研究CSGP、SGP2和SGP3对细胞氧化损伤的直接和间接保护作用,结果表明,CSGP对tBOOH致细胞氧化损伤无直接保护作用,但在浓度为0.2、1（?）5 μg/mL时则具有明显的间接保护作用。SGP3兼具直接和间接保护作用,而SGP2只能在较低浓度（0.2 μg/mL）发挥直接和间接保护作用。其他生物活性结果表明,三个组分在浓度为0.2、1和5 μg/mL时均可明显促进淋巴细胞增殖,其中SGP2活性较强。在浓度为1、10、50和100μg/mL时三个组分对补体经典途径均具有一定程度的抑制作用,SGP3的抑制活性较强。浓度为5～40 μg/mL时,CSGP和SGP3可明显延长APTT和TT,而SGP2无抗凝血活性；CSGP、SGP2和SGP3均无细胞毒作用。其次,采用Triton-乙醇醇沉法制备了扇贝性腺糖蛋白（CSGG）.经DEAE-52分离纯化后得到3个组分SGG1、SGG2和SGG3。用胰蛋白酶水解SGG2,对其水解产物采用Sepharose CL-6B进一步分离纯化得到分子量不同的三个组分SGG2-1、SGG2-2和SGG2-3。CSGG具有一定的DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力及还原能力。SGG2-2对tBOOH致细胞氧化损伤的保护作用强于SGG2-1和SGG2-3。三者的淋巴细胞增殖活性为SGG2-1>SGG2-2>SGG2-3。上述研究表明,扇贝性腺多糖具有潜在的抗氧化、促进淋巴细胞增殖、补体抑制和抗凝血等活性,无细胞毒作用；扇贝性腺糖蛋白也具有潜在的抗氧化作用和淋巴细胞增殖促进活性。上述研究为扇贝性腺的深加工提供了一定依据,但扇贝多糖-蛋白复合物的构效关系还有待深入研究。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 多糖
• 1.1.1 多糖概述
• 1.1.2 多糖的提取及分离技术
• 1.2 贝类多糖的生物活性
• 1.2.1 贝类概述
• 1.2.2 贝类多糖的生物活性
• 1.2.2.1 抗氧化活性
• 1.2.2.2 抗肿瘤活性
• 1.2.2.3 抗病毒活性
• 1.2.2.4 增强机体免疫活性
• 1.2.2.5 降血糖和抗凝血活性
• 1.3 多糖中蛋白质的作用
• 1.4 本论文研究背景及主要内容
• 第二章 扇贝性腺多糖的制备及生物活性研究
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验原料
• 2.1.2 主要仪器与设备
• 2.1.3 酶制剂
• 2.1.4 主要试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 基本组分测定
• 2.2.2 扇贝性腺粗多糖的制备
• 2.2.2.1 扇贝性腺多糖的提取
• 2.2.2.2 二次酶解除蛋白
• 2.2.2.3 链酶蛋白酶除蛋白
• 2.2.2.4 冻融离心除蛋白
• 2.2.2.5 透析除杂
• 2.2.3 扇贝性腺多糖的分离纯化
• 2.2.4 红外光谱分析
• 2.2.5 扇贝性腺多糖的分子量测定
• 2.2.6 扇贝性腺多糖活性研究
• 2.2.6.1 二苯代苦味酰自由基（DPPH·）的清除能力
• 2.2.6.2 对羟自由基（·OH）的清除能力
• 2.2.6.3 还原能力
• 2.2.6.4 对tBOOH致细胞氧化损伤的保护作用
• 2.2.6.5 对淋巴细胞增殖的影响
• 2.2.6.6 对补体活性的影响
• 2.2.6.7 对Hela细胞体外增殖的影响
• 2.2.6.8 抗凝血活性的影响
• 2.2.7 统计学方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 扇贝性腺基本组分分析
• 2.3.2 扇贝性腺粗多糖的制备
• 2.3.3 扇贝性腺粗多糖的分离纯化
• 2.3.4 扇贝性腺多糖分子量测定
• 2.3.5 扇贝性腺多糖红外光谱分析
• 2.3.6 扇贝性腺多糖活性研究
• 2.3.6.1 DPPH·清除能力
• 2.3.6.2 羟基自由基清除能力
• 2.3.6.3 还原能力
• 2.3.6.4 对tBOOH致细胞氧化损伤的保护作用
• 2.3.6.5 对淋巴细胞增殖的影响
• 2.3.6.6 对补体活性的影响
• 2.3.6.7 对Hela细胞体外增殖的影响
• 2.3.6.8 对抗凝血活性的影响
• 2.4 本章小结
• 第三章 扇贝性腺糖蛋白的制备及活性研究
• 3.1 材料
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 扇贝性腺糖蛋白粗提物的制备
• 3.2.2 扇贝性腺糖蛋白粗提物的分离纯化
• 3.2.3 扇贝性腺糖蛋白SGG相对分子量的测定
• 3.2.4 扇贝性腺糖蛋白SGG纯度鉴定
• 3.2.5 不同分子量扇贝性腺糖蛋白的制备
• 3.2.6 扇贝性腺糖蛋白CSGG抗氧化活性测定
• 3.2.7 不同分子量扇贝性腺糖蛋白对tBOOH致细胞氧化损伤的保护作用
• 3.2.8 不同分子量扇贝性腺糖蛋白对淋巴细胞增殖的影响
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 扇贝性腺糖蛋白的组分分析
• 3.3.2 扇贝性腺糖蛋白的分离纯化
• 3.3.3 扇贝性腺糖蛋白纯度鉴定
• 3.3.4 扇贝性腺糖蛋白SGG2的分子量测定
• 3.3.5 不同分子量扇贝性腺糖蛋白的制备
• 3.3.6 扇贝性腺糖蛋白抗氧化活性研究
• 3.3.6.1 对二苯代苦味酰自由基（DPPH·）的清除作用
• 3.3.6.2 对羟自由基的清除作用
• 3.3.6.3 还原能力
• 3.3.7 不同分子量扇贝性腺糖蛋白对tBOOH致细胞氧化损伤的保护作用
• 3.3.8 不同分子量扇贝性腺糖蛋白对淋巴细胞增殖活性的研究
• 3.4 本章小结
• 结论
• 问题与展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录