论文摘要
软枣猕猴桃（Actinidia arguta Sieb.et Zucc）又名软枣子、猕猴梨、藤瓜和藤枣,为猕猴桃科猕猴桃属,多年生落叶藤本植物。分布于东北、华北、山东、西北及长江流域,其中东北南部山区较多见。根、茎、叶及果实均可入药。根味淡、微涩、有健胃、清热、利湿之功能,茎可做手杖及烟袋杆,其果实多汁,营养丰富,酸甜适口,风味独特。软枣猕猴桃中富含Vc和实用纤维素,果实中还含有糖类、黄酮类、维生素、氨基酸、矿质元素等功能活性成分,具有滋补强身、生津润肺等作用,对高血压、心绞痛、高血脂等症有一定的疗效。黄酮类化合物是一类在植物中分布很广而且重要的天然产物,具有广泛的生物活性和药理活性,对其进行深入的研究,有利于保护野果资源,为东北野生软枣猕猴桃的综合开发利用奠定理论基础,具有重要的科研价值。目前,国内外仅对软枣猕猴桃的成分和初步提纯进行了研究,但由于品种不同,成分也有所差异。本文对东北野生软枣猕猴桃黄酮类化合物的测定方法、提取、分离、纯化及结构鉴定进行了系统研究,主要研究结论如下：1、比较了NaNO2-Al（NO3）3比色法、AICl3比色法、ZrOCl2比色法、HPLC法等黄酮检测方法,其中AICl3比色法最适合作为软枣猕猴桃,通过比较分析,得到了ZrOCl2比色法与HPLC法之间的校正系数为0.89。HPLC法虽然可以较准确地测定总黄酮含量,但对设备和操作要求较高,计算繁琐。以芦丁为标准品的ZrOCl2比色法是一种操作简便、结果较准确的方法,可用于软枣猕猴桃总黄酮类含量的快速测定。2、与传统的乙醇回流法相比,超声辅助提取能明显提高提取率、缩短提取时间。在单因素实验的基础上,采用SAS9.1软件中的二次通用旋转组合设计方案,进行参数优化。超声辅助提取软枣猕猴桃中黄酮类化合物的最佳工艺条件为：乙醇溶液浓度70%、料液比1：4（g/mL）、超声功率270W、超声时间6min、水浴温度60℃、水浴时间40min,提取2次,在此条件下,黄酮类化合物的提取率为0.0297%（湿重）。3、在选取的各种大孔吸附树脂中,HPD600最适合纯化软枣猕猴桃黄酮,最佳工艺参数为：上样液质量浓度为0.5mg/mL,上样液pH值为3-4,吸附流速为2mL/min,上样量为3BV,以3BV的水冲洗树脂柱,4BV的80%乙醇溶液以2mL/min的速率洗脱效果最佳。经处理后的软枣猕猴桃总黄酮平均回收率可达86.5%,平均纯度为37.2%。4、软枣猕猴桃黄酮的HPLC检测色谱条件为：流动相水：甲醇（V/V）=55：45,流速0.8mL/min,检测波长340nm,柱温30℃。5、通过聚酰胺柱层析梯度洗脱能对软枣猕猴桃黄酮进行有效的分离,是纯度提高至86%左右。将聚酰胺纯化产物使用半制备型液相色谱处理,得到五个软枣猕猴桃单体,经纯度检验均为99%以上。得到五种化合物,用面积归一化法经高效液相色谱进行纯度检验,峰面积均为99%以上。6、通过核磁对软枣猕猴桃各黄酮组分进行结构鉴定,样品主要为：异槲皮苷、槲皮素和芦丁