体外培育牛黄对海人酸致痫大鼠的干预作用

论文摘要

目的:大鼠海马局部注射海人酸,诱导建立颞叶癫痫大鼠模型,给予体外培育牛黄、卡马西平干预,观察大鼠的行为学、脑电图改变和病理学改变,分析体外培育牛黄对颞叶癫痫大鼠的干预作用,探讨其可能的作用机制,了解体外培育牛黄治疗人类颞叶癫痫的可能性。方法:1.实验动物及分组:雄性Witar大鼠68只,体重280～300g,随机分四组,分别为:癫痫模型组（第1组）、体外培育牛黄组（第2组）、卡马西平组（第3组）:各22只;海马CA3腹后区定位组（第4组）2只。2.通过脑立体定向技术,向大鼠海马腹后区注射海人酸,建立颞叶癫痫动物模型,观察其痫性发作级别,发作等级在Ⅲ级～Ⅴ级的大鼠进入本实验。3.给药方法:按Racine分级标准判定造模成功,入选各组后,第2组（体外培育牛黄组）及第3组（卡马西平组）即首次给药,第1组（模型组）给予相同量生理盐水。1)第4组（海马CA3腹后区定位组）:进针后注入美蓝（亚甲蓝）,术后10小时处死大鼠,对照大鼠脑立体定向图谱,观察定位准确性。2)各组正常饲料喂养。3)癫痫模型组用灌胃器灌注生理盐水2ml,1/日,共三天。4)卡马西平组:用灌胃器灌注卡马西平0.1g,1/日,共三天。5)体外培育牛黄组:用灌胃器灌注人工牛黄0.1g,1/日,共三天。4、观察指标:观察大鼠行为学变化,脑电图改变,测定大鼠海马CA3区残留锥体细胞、GABA能神经元的的数量及海马CA3区苔状纤维的变化。5、统计分析:所有数据均采用SPSS11.5软件包进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用S-N-K法（P<0,05）。结果:1、行为学:反复痫性自发发作,每周发作1-3次,均为1-3级发作。体外培育牛黄组、卡马西平组癫痫发作次数少于模型组,并且明显的活动量多,体重恢复快。2、脑电图: 3天组大鼠手术侧颞区出现棘波发放,7天组扩展至对侧区域,并发展为周期性丛集性慢波,30天组大鼠左右侧几乎同时出现阵发棘波发放。同模型组相比,体外培育牛黄组、卡马西平组脑电图表现癫痫波发放明显较少。3、HE染色:术后3天,3组大鼠手术侧海马CA3区出现明显的神经元变性和坏死。术后7天,CA3区分层结构逐渐紊乱甚至消失,坏死灶周围可见较多淋巴细胞浸润。术后30天,手术侧CA3区锥体细胞显著丢失。手术侧CA3区受损最重,CA1区次之,齿状回及对侧神经元受损最轻。手术侧海马CA3区残存的细胞数三组间两两比较差别均有显著性统计学意义,p<0.01。说明体外培育牛黄及卡马西平均对CA3区锥体细胞有保护作用,但效果略差于卡马西平。4、免疫组化显示:GABA能阳性神经元数目三组间两两比较差别均有显著性统计学意义。当已形成致痫灶,GABA能抑制性中间神经元数目越多,后期痫性发作的被抑制可能性越大。本实验数据显示,同模型组相比,体外培育牛黄对CA3区GABA能抑制性中间神经元作用有明显的保护作用,但效果不及卡马西平。5、手术侧海马CA3区苔状纤维分布面积的统计结果显示:牛黄组与模型组相比p<0.01,两组差别有显著性统计学意义;牛黄组与卡马西平组相比p>0.1,两组差别无显著性统计学意义。两治疗组CA3区苔状纤维分布的面积的统计结果与CA3区残存锥体细胞的统计结果不一致。提示,体外培育牛黄除有保护CA3区锥体细胞的作用外,还可能在苔状纤维侧支生芽的其他机制上发挥影响,确切机制尚需进一步研究。结论:1、向一侧海马腹侧注射海人酸能成功建立颞叶癫痫模型。2、体外培育牛黄组大鼠在毛色光泽、活动量、采食水及等方面明显优于模型组,提示:体外培育牛黄能明显改善致痫鼠的行为学表现;还可降低大鼠致痫后的防御反应分级,减少致痫鼠的癫痫波发放。3、本实验证实,体外培育牛黄可以减轻KA致痫大鼠的神经病理学改变,保护海马结构的神经元,尤其对海马CA3区影响最大。4、体外培育牛黄对CA3区GABA能抑制性中间神经元有明显的保护作用。5、体外培育牛黄除有保护CA3区锥体细胞的作用外,还可能在苔状纤维侧支生芽的其他机制上发挥影响,确切机制尚需进一步研究。

论文目录

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• 材料与方法
• 结果
• 附表
• 附图
• 讨论
• 结论
• 参考文献
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