论文摘要
目的（1）通过小鼠成熟卵母细胞的海藻糖负载实验,探讨海藻糖载入卵母细胞内的方法的可行性;探讨载入卵母细胞内的海藻糖的定量分析;探讨卵母细胞内载入适量海藻糖对卵母细胞成活率的影响。（2）通过对小鼠成熟卵母细胞的玻璃化冷冻,进一步探讨玻璃化冷冻卵母细胞的方法;同时比较载入海藻糖的卵母细胞与未载入海藻糖的卵母细胞经过玻璃化冷冻后的成活率。（3）探讨海藻糖孵育并进行玻璃化冷冻对卵母细胞的发育潜能的影响。方法（1）60只清洁级成年健康ICR雌性小鼠,进行控制性超排卵（COH）,将获得的卵母细胞放入0.5mol/L的海藻糖中分为2组进行孵育（37℃1h;37℃2h;37℃3h）。（2）通过PI、Hoechst 33342对海藻糖孵育后及未使用海藻糖孵育的卵母细胞进行染色,观察卵母细胞在高渗的细胞外环境下是否出现卵母细胞的死亡。（3）对孵育后的卵母细胞进行胞内海藻糖处理,利用硫酸蒽酮法进行胞内海藻糖的测定。（4）利用玻璃化冷冻方法对用海藻糖孵育的卵母细胞及未使用海藻糖孵育的卵母细胞进行冷冻,解冻后观察卵母细胞成活率。（5）将玻璃化冷冻解冻后的孵育组与未孵育组的卵母细胞在复苏后体外培养＞2h后,采用IVF方法授精,通过卵母细胞两细胞形成率及囊胚形成率测定冷冻对卵母细胞的发育潜能的影响。结果（1）0.5mol/L的海藻糖孵育后卵母细胞的体积较未孵育的卵母细胞缩小,卵母细胞胞间隙明显增大,且在孵育3h时的胞质颗粒较孵育1h及2h的卵母细胞粗大。（2）通过硫酸蒽酮法测定到经孵育后3h的卵母细胞胞内海藻糖浓度为35ummol/L,而孵育1h及2h未测出含量。（3）经海藻糖孵育后的卵母细胞存活时染色质被Hoechst 33342染色成为蓝色,死亡的卵母细胞被PI、Hoechst 33342染色染色质成为粉红色。（4）利用15%EG+15%DMSO+0.5M Trehalose+10%SSS对孵育后及未孵育后的卵母细胞进行玻璃化冷冻,复苏后两组的成活率分别为:92.4%VS 92.6%（P＞0.05）。（5）两组的2-细胞形成率及囊胚形成率分别为80%VS23.3%（P＜0.05）;13.3%VS 0%（P＞0.05）。结论通过海藻糖孵育方法进行玻璃化冷冻卵母细胞得到结论如下:（1）通过将卵母细胞置于高浓度的海藻糖溶液中的方法可以使海藻糖载入到的卵母细胞胞内部。（2）高浓度的海藻糖内孵育卵母细胞≤3h不会对其存活造成影响。（3）经孵育3h的卵母细胞行玻璃化冷冻的成活率与对照组无统计学上的差异（P＞0.05）;但是在2-细胞形成率有明显差异（P＜0.001）,而在囊胚形成率上没有差异（P＞0.05）。
论文目录
相关论文文献
- [1].优质囊胚形成相关因素分析[J]. 江西医药 2019(06)
- [2].姐妹胚胎囊胚形成率与卵裂期胚胎移植临床结局的相关性[J]. 生殖医学杂志 2015(12)
- [3].早期分裂三细胞对囊胚形成预测的研究[J]. 中国医药导报 2014(28)
- [4].囊胚培养的相关因素分析[J]. 江西医药 2013(04)
- [5].提高人胚胎干细胞建系率的优选培养体系与方法[J]. 现代生物医学进展 2012(11)
- [6].精子DNA碎片化指数与体外受精-胚胎移植结局的关系[J]. 江苏大学学报(医学版) 2019(02)
- [7].体外受精周期中正常精子形态对D 3优质胚胎的囊胚形成率及囊胚质量的影响[J]. 中国计划生育和妇产科 2019(07)
- [8].内毒素和大肠杆菌繁殖对小鼠胚胎体外发育的影响[J]. 重庆医科大学学报 2015(06)
- [9].冻融胚胎囊胚培养中胚胎质量与囊胚形成之间关系[J]. 生殖医学杂志 2018(05)
- [10].3种不同载体对卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响[J]. 安徽医科大学学报 2012(08)
- [11].体外受精周期中不同原核数发育囊胚使用价值的探讨[J]. 现代妇产科进展 2014(06)
- [12].囊胚培养的相关因素分析[J]. 现代实用医学 2011(05)
- [13].拮抗剂方案中不同剂量GnRH-ant抑制黄体生成素峰效果的临床分析[J]. 现代医院 2018(05)
- [14].两种促排卵方案在体外受精-胚胎移植中的对比研究[J]. 实用医院临床杂志 2016(04)
- [15].不同冷冻载体对小鼠MⅡ期卵母细胞玻璃化冻、融技术影响[J]. 安徽医科大学学报 2008(02)
- [16].体外受精前禁欲时间小于24小时对治疗结局的影响[J]. 中国妇幼健康研究 2020(07)
- [17].不孕患者自身因素和胚胎形态学评价指标与囊胚形成关系的分析[J]. 中国优生与遗传杂志 2014(02)
- [18].D3低形态学评分胚胎的继续培养及其意义[J]. 中国妇幼保健 2012(31)
- [19].TIP60调控DNA作用对胚胎发育中的影响及作用机制[J]. 海南医学院学报 2020(04)
- [20].影响可利用囊胚形成的相关因素分析[J]. 医药论坛杂志 2019(09)
- [21].两种活检方法对新鲜胚胎和冻融胚胎行植入前遗传学诊断17个周期分析[J]. 中国优生与遗传杂志 2013(07)
- [22].辅助激活联合补救单精子胞浆注射在常规受精失败卵母细胞中的应用[J]. 中国妇幼保健 2010(12)
- [23].不同受精方式及精子来源对剩余胚胎发育能力的影响[J]. 重庆医学 2016(03)
- [24].人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究[J]. 国际生殖健康/计划生育杂志 2008(05)
- [25].4B级以上D3胚胎囊胚形成影响因素分析[J]. 生殖医学杂志 2017(09)
- [26].≥35岁患者短效长方案中促性腺激素添加时机的选择[J]. 实用临床医药杂志 2016(21)
- [27].体外受精-胚胎移植中短效长方案不同获卵数的临床结局分析[J]. 中国妇幼保健 2015(13)
- [28].骨髓间充质干细胞移植在卵巢早衰小鼠卵巢及生育功能重建中的作用[J]. 安徽医科大学学报 2017(11)
- [29].D3形态学低评分胚胎囊胚形成的影响因素分析[J]. 国际生殖健康/计划生育杂志 2014(05)
- [30].序贯培养对比序贯联合子宫内膜细胞共培养的方法对体外胚胎发育的影响[J]. 中国优生与遗传杂志 2013(09)