口服VEGFR-2 DNA疫苗抗小鼠Lewis肺癌血管生成的实验研究

论文摘要

目的：研究以VEGFR-2为靶点的口服DNA疫苗抗C57BL／6小鼠Lewis肺癌生长和转移的作用，并探讨其可能的作用机制。方法：将C57BL／6小鼠分为三个大组，每个大组内又随机分为疫苗组、空质粒组和生理盐水组，经口服免疫小鼠三次后，建立肺癌动物模型。第一大组用3LL细胞建立肺癌皮下移植瘤动物模型，记录小鼠的死亡时间，比较各组小鼠的累计生存率和中位生存期。第二大组用3LL细胞建立肺癌皮下移植瘤动物模型，记录小鼠皮下肿瘤生长情况；采用流式细胞术监测小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞水平，评价小鼠免疫功能；记录各组小鼠离体肿瘤体积、肿瘤湿重；免疫组织化学法计数肿瘤微血管密度（MVD），观察疫苗对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤生长的抑制作用，并探讨可能的作用机制。第三大组小鼠尾静脉注射3LL细胞，建立肿瘤肺转移动物模型，采用流式细胞术监测各组小鼠外周血CD44v阳性细胞；体视学方法计数肺脏肿瘤转移病灶，肺组织病理切片HE染色鉴定转移病灶，观察疫苗抑制小鼠肺转移癌的情况。结果：1．建立了小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型和肺转移癌模型。2．疫苗组小鼠的累计生存率与空质粒组、生理盐水组比较有统计学意义（P＜0.05）；疫苗组的中位生存期为48天，空质粒组32天，生理盐水组31天。3．疫苗抑制小鼠Lewis肺癌生长作用的研究结果显示：1)疫苗组小鼠肿瘤生长缓慢，而空质粒组和生理盐水组肿瘤生长较快；疫苗组、空质粒组、生理盐水组的离体肿瘤体积分别为448.41±194.00、1355.39±468.91、1280.15±264.49，肿瘤重量分别为2.05±1.32、4.83±1.47、5.12±1.02，平均微血管密度分别为1.75±1.07、6.89±2.52、7.57±3.75，重组疫苗组与其他两组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），而空质粒组和生理盐水组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。2)流式细胞术检测结果显示：免疫前三组之间CD3+、CD4+、CD8+T细胞计数，CD4+／CD8+比值均无统计学意义（P＞0.05），免疫后疫苗组CD3+、CD4+、CD8+T细胞较免疫前明显增高（P＜0.05），和空质粒组、生理盐水组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；接种肿瘤以后，空质粒组和生理盐水组CD3+、CD4+、CD8+T细胞计数，CD4+／CD8+比值明显降低（P＜0.05），和疫苗组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。3．疫苗抑制小鼠Lewis肺转移癌研究结果显示：1)重组疫苗能显著抑制荷瘤小鼠肺转移，疫苗组、空质粒组、生理盐水组的肺转移瘤结节分别为0.7+0.48、2.10±0.74、2.30±0.68。2)流式细胞术显示：在接种肿瘤后空质粒组和生理盐水组外周血CD44v阳性细胞计数明显高于疫苗组，差异有统计学意义（P＜0.05），生理盐水组和空质粒组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：1．该口服DNA疫苗能延长Lewis肺癌小鼠的生存时间。2．该口服DNA疫苗能通过抑制肺癌血管生成而抑制肿瘤的生长。3．该口服DNA疫苗对Lewis肺癌的C57BL／6小鼠肺转移具有抑制作用。4．该口服DNA疫苗的作用机制，可能是通过打破机体对自身抗原的免疫耐受而激活细胞免疫，杀伤过表达VEGFR-2的肿瘤血管内皮细胞，抑制肿瘤血管生成，进而抑制肺癌生长和转移。

论文目录

• 一. 论文
• 1. 中文摘要
• 2. 英文摘要
• 3. 论文正文
• 引言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 二. 附录
• 三. 综述
• 四. 已刊文章
• 四. 致谢