蛇莓酚性成分及其抗氧化活性的研究

论文摘要

蛇莓[Duchesnea indica（Andr）Focke]为蔷薇科蛇莓属植物,以全草入药,具有清热解毒,收敛止血之功效,常与其他中药配伍用来治疗妇科炎症和肿瘤。在对其进行抗肿瘤活性筛选中发现,蛇莓酚性提取物（DPE）是其最具活性的有效部位。另外,肿瘤的发生和发展与机体内生化物质的氧化有密切关系。因此,本论文对DPE的化学成分和抗氧化活性进行了研究,目的在于认识和了解蛇莓抗氧化和抗肿瘤的物质基础和作用机制,为今后更好地开发利用蛇莓资源提供依据。利用聚酰胺柱层析和反复的Saphedex LH20凝胶柱层析,从DPE中分离得到了两个酚性化合物,根据其理化性质和各种光谱数据分别鉴定为鞣花酸（Ellagic acid.EA）和短叶苏木酚羧酸（Brevifolincarboxylic acid,BA）。首次建立了HPLC-UV法用于同时测定蛇莓中的EA和BA的含量,并比较了不同产区蛇莓化学成分的指纹图谱。样品以50%乙醇提取,以C18色谱柱进行分离。结果显示,EA和BA均具有良好的线性范围（r2＞0.999）、精密度（RSD＜0.50%）和重现性（RSD＜1.50%）;回收率分别为99.65%和102.95%;最低检测限分别为12和20ng/mL（进样体积为20μL时）。研究发现,来自安徽、山东、河北三个产区的蛇莓样品的化学组成非常相似,EA和BA的含量分别介于0.80-1.04%和0.08-0.11%之间。实验证明,此方法准确可靠、方便易行,为蛇莓的质量控制提供了可靠方法。体外实验表明,DPE及其两个主要酚性成分EA和BA均具有很强的清除DPPH自由基的能力,IC50分别为76.76μg/ml,88.72μmol/L和131.67μmol/L;同时还具有很强的将Fe3+还原为Fe2+的能力,其作用呈现剂量—效应依赖关系;并且它们都能保护由过氧化氢诱导的红细胞溶血,IC50分别为6.70μg/ml,28.15μmol/L和80.55μmol/L。体内实验采用慢性氧化损伤和急性氧化损伤两种模型,动物分别以DPE（0.25,0.5,1 g/kg/d）三个剂量组连续灌服20日。U14移植瘤小鼠（慢性）模型表明,DPE能够保护小鼠由恶性肿瘤引起的氧化损伤,在0.5或1 g/kg/d剂量下,可显著提高其肝脏中的超氧化物歧化酶（SOD）活力和总抗氧化能力（T-AOC）,降低过氧化产物丙二醛（MDA）的含量,使其趋于正常。环磷酰胺（腹腔注射150 mg/kg）诱导的氧化（急性）模型表明,DPE可保护小鼠肝脏和脑的氧化损伤。在0.5或1 g/kg/d剂量下,可显著提高血浆中SOD和CAT活力,以及肝脏和脑中SOD活力和T-AOC,使其趋于正常;0.25 g/kg/d剂量下就可显著降低肝和脑中MDA含量,使其均趋于正常。体外细胞模型研究表明,V79细胞（中国仓鼠肺成纤维细胞）与DPE预孵育24 h后,可显著降低200μmol/L H2O2对其造成的氧化损伤。DPE 20μg/mL时可显著升高细胞内SOD活力和降低MDA的水平;60μg/mL时可显著提高CAT的活力和还原性谷胱甘肽（GSH）的含量,使其均趋于正常。

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Abstract

缩略语

第一章蛇莓化学成分和药理作用的研究进展

1 蛇莓的化学成分

2 蛇莓的药理作用

3 临床应用

4 本研究的目的和意义

参考文献

第二章蛇莓中酚性成分的提取分离和结构鉴定

1 仪器与试剂

2 实验方法和结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第三章 HPLC法测定蛇莓中鞣花酸和短叶苏木酚羧酸的含量

1 仪器与试药

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

参考文献

第四章蛇莓中酚性成分的抗氧化活性研究

第一节氧化应激、抗氧化和抗氧化活性评价（综述）

1 氧化应激

2 氧化应激的危害

3 天然抗氧化剂

4 抗氧化活性的评价方法

5 本章研究的目的

参考文献

第二节蛇莓酚性提取物,鞣花酸和短叶苏木酚羧酸的体外抗氧化活性

1 仪器与试药

2 实验方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第三节蛇莓酚性提取物对移植瘤小鼠肝抗氧化酶活性的影响

1 仪器与试药

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

参考文献

第四节蛇莓酚性提取物对环磷酰胺诱导的小鼠氧化损伤的保护作用

1 仪器与试药

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

参考文献

2O₂诱导的V79细胞氧化损伤的保护作用'>第五节蛇莓酚性提取物对H₂O₂诱导的V79细胞氧化损伤的保护作用

1 仪器与试药

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

参考文献

总结

致谢

硕士期间发表文章及申请专利

附图

蛇莓酚性成分及其抗氧化活性的研究

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