褪黑素对脂多糖刺激小鼠抗氧化与免疫功能的影响

论文摘要

本文研究了褪黑素对LPS刺激小鼠氧化应激和免疫功能的的调节作用,并分析了他们之间的相关性,进一步通过对氧化还原及免疫相关基因的表达的影响探讨其可能的保护机制。选用清洁级三周龄雄性昆明小鼠70只,分成四组:正常组、生理盐水组、低褪黑素组、高褪黑素组。预饲一周后,生理盐水组每天灌胃生理盐水0.2 mL;低褪黑素组每天灌胃1 mg/kg.BW的褪黑素;高褪黑素组每天灌胃2 mg/kg.BW的褪黑素。灌胃三周后,除正常组外,每组均腹腔注射5 mg/kg.BW的LPS 0.2 mL,正常组腹腔注射同剂量的无菌生理盐水,注射后4、16 h,测定机体活性氧（ROS）水平、抗氧化能力;采用ELISA检测血浆中IL-1、TNF-α、IL-10的含量;实时定量PCR检测肝脏金属硫蛋白1（Mt1）、核转录因子-B（NF-κB）、热激蛋白70（HSP70）和转录活化蛋白-1（AP-1）基因表达。实验结果:（1）褪黑素可以显著降低LPS刺激小鼠机体的ROS水平,增强抗氧化酶的活性,提高机体的抗氧化能力。（2）褪黑素可以显著降低LPS刺激小鼠十二指肠MPO活性,抑制血浆炎性细胞因子IL-6、TNF-α分泌,促进抗炎性细胞因子IL-10的分泌,从而减轻机体的炎性损伤。（3）褪黑素可以使LPS刺激小鼠肝脏Mt1 mRNA表达上调、NF-κB mRNA、HSP70 mRNA、AP-1 mRNA表达下调,从而保护机体,改善LPS导致的氧化和炎性损伤。结论:腹腔注射脂多糖,引起机体的急性炎症反应、降低抗氧化能力,导致免疫功能状态失调。而灌胃褪黑素可有效清除LPS诱导的机体过量产生的ROS,提高机体抗氧化能力,并抑制炎性细胞因子的分泌,改善免疫功能。其可能机制为褪黑素通过调节相关基因的表达,改善抗氧化与免疫功能。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 褪黑素与抗氧化作用
• 1.1.1 直接清除自由基作用
• 1.1.2 对氧化和抗氧化过程有关酶类的影响
• 1.1.3 褪黑素的协同作用
• 1.2 褪黑素与免疫调节作用
• 1.2.1 褪黑素与免疫器官
• 1.2.2 褪黑素对免疫细胞的影响
• 1.2.3 褪黑素对细胞因子的影响
• 1.3 抗氧化与免疫功能调节
• 1.3.1 机体抗氧化系统
• 1.3.2 氧化应激与炎性反应
• 1.3.3 细胞因子及相关基因与免疫调节
• 1.4 立题意义及研究内容
• 2 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物与分组
• 2.1.2 血样及组织样品采集
• 2.1.3 完全培养液制备
• 2.1.4 药品及试剂
• 2.1.5 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 全血和组织 ROS 水平和抗氧化能力的检测
• 2.2.2 脏器指数、腹腔巨噬细胞吞噬率及脾淋巴细胞转化率的测定
• 2.2.3 血清中NO 水平和NOS 活性测定
• 2.2.4 十二指肠髓过氧化物酶（MPO）活性测定
• 2.2.5 肝组织匀浆液中细胞因子的 ELISA 检测
• 2.2.6 肝脏中氧化应激与炎性反应相关基因的相对定量表达
• 2.2.7 数据处理与统计分析
• 3 结果与讨论
• 3.1 褪黑素对LPS 刺激小鼠机体ROS 水平和抗氧化能力的影响
• 3.1.1 褪黑素对LPS 刺激小鼠全血及组织ROS 水平的影响
• 3.1.2 褪黑素对LPS 刺激小鼠血浆及组织抗氧化能力的影响
• 3.2 褪黑素对LPS 刺激小鼠脏器指数的影响
• 3.2.1 褪黑素对LPS 刺激小鼠脾脏指数的影响
• 3.2.2 褪黑素对LPS刺激小鼠肝脏指数的影响
• 3.2.3 褪黑素对LPS 刺激小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率的影响
• 3.2.4 褪黑素对LPS刺激小鼠脾淋巴细胞转化率的影响
• 3.2.5 小鼠血浆抗氧化能力与巨噬细胞吞噬率的相关性分析
• 3.2.6 小鼠脾脏抗氧化能力与淋巴细胞转化率的相关性分析
• 3.3 褪黑素对LPS 刺激小鼠炎性反应的影响
• 3.3.1 褪黑素对LPS刺激小鼠十二指肠髓过氧化物酶（MPO）活性的影响
• 3.3.2 褪黑素对LPS 刺激小鼠肝脏中NO 含量和NOS 活性的影响
• 3.3.3 褪黑素对LPS 刺激小鼠炎性、抗炎性细胞因子的影响
• 3.3.4 小鼠十二指肠抗氧化能力与MPO 的相关性分析
• 3.3.5 小鼠血浆T-AOC 与炎性、抗炎性细胞因子水平的相关性分析
• 3.3.6 小鼠肝脏抗氧化能力与肝脏中NO、NOS相关性分析
• 3.4 褪黑素对LPS 刺激小鼠肝脏氧化应激与炎性反应相关基因表达的影响
• 3.4.1 褪黑素对LPS刺激小鼠肝脏与Mt1表达的影响
• 3.4.2 褪黑素对LPS 刺激小鼠肝脏NF-кB 表达的影响
• 3.4.3 褪黑素对LPS 刺激小鼠肝脏HSP70 表达的影响
• 3.4.4 褪黑素对LPS 刺激小鼠肝脏AP-1 表达的影响
• 论文主要结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文