论文摘要
第一部分:铁甲草的化学成分分析目的:铁甲草在广东梅州地区广泛用于治疗肝病,鉴于国内外关于铁甲草化学成分的报道较少,因此对其的化学成分进行分离鉴定很有必要。方法:用85%乙醇提取干燥铁甲草,乙醇提取物采用溶剂系统分离法,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取,回收溶剂,得石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇四个部分。乙酸乙酯部位用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、反相柱层析、聚酰胺柱层析、制备性高效液相色谱等方法分离纯化得到单体成分。利用理化性质和现代光谱(UV、IR、MS、1HNMR、13CNMR、DEPT)等方法,再结合文献资料加以鉴定。结果:铁甲草乙酸乙酯部位用硅胶柱层析,不同溶剂洗脱,从中分离得到8个化合物,应用理化常数和光谱数据鉴定,分别为β—谷甾醇（1）、齐墩果酸（2）、大黄素（3）、（R）-鹰爪三醇（4）、胡萝卜苷（5）、间苯二酚（6）、木犀草素（7）、α-L-鼠李糖（8）。结论:分离得到的化合物除大黄素外,其余7个化合物均为首次从铁甲草中分离得到,其中化合物（R）-鹰爪三醇为首次从该科（豆科）植物中发现。第二部分:铁甲草抑制二甲基亚硝胺诱导抗大鼠肝纤维化的研究目的:观察铁甲草水提取物及醇提取物对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化形成的抑制作用,并探讨其作用机制和抑制胶原纤维增生的机理。方法:采用二甲基亚硝胺（DMN）诱导的肝纤维化模型,以0.5%DMN溶液（1:199生理盐水稀释）按10mg/kg给予大鼠腹腔注射,每周连续注射3天,每天1次,第1周每次用2/3剂量,以后用全量,正常组予以等体积生理盐水注射,共4周。在制备模型的同时,铁甲草水提取和醇提取低、中、高剂量组给予1ml/100g提取液（即1.4g/kg、4.2g/kg、12.6g/kg,相当于按大鼠体表面积换算的等效剂量的1倍、3倍、9倍）和秋水仙碱治疗组1ml/100g（0.2mg/kg）均灌胃给药,每天1次,共四周,正常组和模型组均予1ml/100g生理盐水每日灌胃。第3周结束,眼眶采血后分离血清,送检;第4周末,摘取大鼠另一只眼球,眼眶采血并分离血清,送检,处死动物,并取肝左叶组织,—70℃冷冻保存待检,肝脏右叶用10%甲醛溶液固定,送检做病理切片,OlympusCK40—F200倒置显微镜下观察肝组织病理学变化并进行肝纤维化分级。采用AU5421全自动生化分析仪检测:谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、总胆固醇（CHOL）及甘油三酯（TG）含量;采用FJ—2008PS全自动γ免疫计数器检测:透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原氨基端肽（PCⅢ）;碱水解法检测肝组织羟脯氨酸（Hyp）;统计学处理:计量资料用平均值土标准差表示,采用SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析（one-way ANOVA）,等级资料用Ridit分析。结果:1.铁甲草对模型大鼠血清肝功能和肝纤维化指标的影响四周造模结束后,模型组大鼠血清ALT、AST、TP、ALB、GLB、TBA、CHOL、TG、HA、LN、PCⅢ与正常组比较均有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）;与模型组比较显示:铁甲草各剂量组大鼠血清的ALT含量明显下降（P＜0.05）,醇提取高剂量组大鼠血清的AST、TBA含量明显降低（P＜0.05）,醇提取高、中剂量组大鼠血清的TP、ALB含量明显升高（P＜0.05）,水提取中、低剂量组大鼠血清的TG含量明显升高（P＜0.05）,水提取高剂量组和醇提取各剂量组大鼠血清的HA、LN含量明显降低（P＜0.05）,水提取高剂量组和醇提取高、中剂量组大鼠血清的PCⅢ含量明显下降（P＜0.05）;与秋水仙碱比较显示:醇提取高剂量组大鼠血清的AST含量明显下降（P＜0.05）,醇提取高、中剂量组大鼠血清的TG含量明显降低（P＜0.05）。2.铁甲草对肝纤维化大鼠肝组织羟脯氨酸的影响模型组大鼠肝组织羟脯氨酸含量较正常组明显升高（P＜0.05）;与模型组比较,铁甲草水提取高剂量组和醇提取各剂量组大鼠肝组织羟脯氨酸含量明显下降（P＜0.05）。3.铁甲草对肝纤维化大鼠肝组织形态学的影响光镜观察显示:模型组大鼠正常肝小叶结构破坏,肝索排列紊乱,可见肝细胞点状坏死,肝细胞空泡变性散在分布,间质增生明显,纤维间隔形成,假小叶较多、较完整。各治疗组肝小叶样结构明显改善,纤维间隔较少,肝细胞坏死、炎性细胞浸润少见,但极少数大鼠仍有不完全性假小叶。各组大鼠肝纤维化分级比较,铁甲草水提取高剂量组和醇提取各剂量组与模型组大鼠肝纤维化病理组织学分级比较差异有统计学意义（P＜0.05）,而铁甲草各剂量组与秋水仙碱组肝纤维化病理组织学分级比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:1.铁甲草能有效减轻二甲基亚硝胺引起的肝脏炎症反应,并有一定的护肝降酶作用。2.铁甲草有一定的抑制肝脏胶原纤维增生的作用。综上所述,铁甲草的化学成分中含有糖类、醌类、黄酮类、萜类和甾体类化合物。通过铁甲草水提取物及醇提取物对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的实验显示,发现其有一定的保护肝功能和抑制胶原纤维增生的作用。