论文摘要
目的:CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+regulatory T cell, Tr）是一种免疫抑制性调节细胞,可以抑制机体识别自身肿瘤细胞的肿瘤效应细胞的发育和活化,在介导肿瘤免疫耐受与肿瘤免疫逃逸中起重要作用[1]。本文通过分析CD4+CD25+ Tr细胞在初治化疗前非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者外周血中的分布特点、化疗前后的动态变化及其在缓解期患者外周血中的水平高低,以揭示NHL患者机体的免疫抑制状态,探讨NHL患者免疫抑制与疾病发生、发展的关系,以及化学药物治疗对免疫抑制的影响、缓解期患者的免疫抑制状态及其与疾病复发的关系,期望为进一步的免疫治疗提供理论指导。方法:将研究对象分为3组:初治组为初治化疗前的NHL患者,共30例;缓解组为经过4-8个周期化疗后获得CR和PR的患者,共30例;以上60例NHL患者均为2005年10月-2006年10月间在河北医科大学第四医院血液科住院的患者,均经病理学确诊。对照组为我院门诊健康体检人员,临床除外肿瘤性疾病、感染性疾病,共15例。所有观察对象均于清晨空腹抽取静脉血1ml, EDTA-K2抗凝,应用荧光直接标记法及流式细胞仪检测外周血单个核细胞（PBMNC）膜表面CD3、CD4、CD25的表达。具体方法如下:取EDTA-K2抗凝血0.1ml,分别加入CD3、CD4、CD25抗体各20μl,室温下孵育30分钟,加入红细胞裂解液,用破膜剂及固定剂处理红细胞,然后上机检测。流式细胞仪检测条件及参数如下:采用美国BECKMAN COULTER公司生产的Epics-XLⅡ型流式细胞仪,激发光源为15mW氩离子激光器,激发波长为488nm,应用Expo 32 ADC进行免疫荧光数据分析,用Muticycle AV分析对DNA细胞周期拟合分析。检测前以flow-check TM Fluorpheres （10μm）荧光微球（ REF 6605359. Beckman Coulter, Inc. Fullerton, CA 92835.）作为标准样品调整仪器CV值在2%以内。结果1正常对照组外周血CD3+、CD4+、CD25+、CD4+CD25+ Tr细胞比例分别为（70.51±15.35）%、（37.41±14.23）%、（2.21±1.01）%、（1.96±0.92）%,其中CD4+CD25+Tr细胞比例与国外文献报道一致（1%-2%）[2]。2初治组患者CD3+ T细胞比例为（68.65±9.44）%,对照组（70.51±15.35）%,两者比较无统计学差异（P>0.05）;初治组患者CD4+ T细胞比例（25.99±8.56）%,低于正常对照组（37.41±14. 23）%,两者比较差异显著（P<0.05）;而初治组CD25+及CD4+CD25+ Tr细胞比例均明显高于正常对照组,其中CD25+ T细胞为初治组（7.64±7.41）% vs对照组（2.21±1.01）%,统计学有显著差异（P<0.01）,CD4+CD25+ Tr细胞为初治组（6.26±3.95）%vs对照组（1.96±0.92）%,差异显著（P<0.01）。3初治组NHL患者外周血CD4+CD25+ Tr细胞比例与患者年龄、性别、PS状态、临床分期、病理类型之间未发现明显相关性。4缓解组患者CD3+ T细胞比例为（69.75±9.48）%,较初治组高、而较对照组略低,但各组之间比较无显著差异（P >0.05）;缓解组患者CD4+ T细胞比例为（34.66±6.61） %,明显高于初治组（25.99±8.56）%,统计学有显著差异（P<0.05）,而较对照组偏低,但无统计学意义（P>0.05）;缓解组CD25+ T细胞比例为（7.39±6.23）% ,略低于初治组,但无统计学意义（P>0.05）,明显高于对照组,且差异显著（P<0.01）;缓解组CD4+CD25+ Tr细胞比例为（3.25±2.94）%,明显低于初治组、高于对照组,统计学有显著差异（P < 0. 05）。5化疗后达缓解的NHL患者中,完全缓解者（CR）和部分缓解者（PR）之间外周血CD4+CD25+ Tr细胞比例分别为（3.06±2.75）%,（4.47±3.97）%统计学无显著差异（P >0.05）。结论1初治组NHL患者CD4+CD25+Tr细胞比例明显升高,可能是NHL患者免疫抑制机制之一。2化疗后CD4+CD25+ Tr细胞比例较初治组明显降低。但较正常对照仍是升高的,提示患者在缓解后仍然存在着一定程度的免疫抑制,进行适当的免疫干预可能仍然是有必要的。3化疗后部分CR患者外周血CD4+CD25+ Tr细胞比例仍维持在较高水平,可能是NHL患者复发的原因之一。对于化疗后达到CR的患者,我们正在进一步观察不同Tr水平与疾病复发的关系。因随访时间偏短,目前还不能得出明确的结论。4本实验发现CD4+CD25+ Tr细胞的比例变化与临床缓解率之间具有较好的一致性,因此我们认为,CD4+CD25+ Tr细胞比例是一个较好的反映细胞免疫功能状态的参考指标之一,有望在临床上用于免疫功能的监测并判断预后。
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