论文题目: 苹果再生体系建立与MxIrt1基因功能的初步研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 果树学
作者: 王忆
导师: 韩振海,许雪峰,李天忠
关键词: 苹果,基因,再生,遗传转化
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 以小金海棠（Malus xiaojinensis Cheng et Jiang）及山定子（Malus baccata（L.）Borkh）组培苗为试材,建立了小金海棠及山定子离体叶片再生和转化体系,应用农杆菌介导转化法对其进行了遗传转化研究;在此基础上对MxIrtl基因功能进行初步探讨,并得出如下结果: 1、小金海棠适宜再生的培养基为MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 1.0mg/L+TDZ 4.0mg/L,叶片再生频率可达90%以上,分析表明6-BA、NAA与TDZ三者之间有交互效应。山定子较容易再生,附加TDZ可提高山定子再生率,适宜再生的培养基为MS+6-BA 6.0mg/L+NAA 1.0mg/L+TDZ0.1mg/L,叶片再生频率可达85%以上。14-21d的暗培养有利于叶片再生,幼嫩叶片的再生效果远远高于中等及老化叶片,靠近叶柄的部分再生不定芽效果最理想。小金海棠叶片以向上放置最好,山定子对叶片放置方向不敏感。 2、Km在低浓度下即对不定芽再生产生影响,高浓度则完全抑制叶片再生,小金海棠再生Km筛选压为10-15mg/L,山定子再生Km筛选压为4-6mg/L,两者Hyg筛选压为1.0mg/L。Cef250mg/L不会影响叶片再生。 3、研究农杆菌菌株LBA4404及EHA105对苹果的GUS基因表达影响表明,EHA105菌株及2-3d的共培养时间较好,菌液浓度应在OD600值0.5。 4、MxIrt1基因为小金海棠中克隆得到的Fe（Ⅱ）转运载体。构建小金海棠MxIrt1基因的植物表达载体pBIrt、pBIrtR、pBIrt-eGFP及pCWIrt,对苹果及烟草进行转化。经PCR及Southern鉴定,获得转化pCWIrt的烟草植株及转pBIrt的小金海棠植株。转基因烟草植株较之对照表现为叶片圆润,在缺铁胁迫下伴有生根量增加等特点。正常培养基中部分转基因烟草老叶出现斑点状枯斑现象。 5、构建与His-tag融合的MxIrt1基因原核表达载体,在30℃,IPTG 0.5mM下诱导7h可表达出相应40kD的蛋白条带。 6、Southern结果显示小金海棠及山定子均含有MxIrt1基因,且以多拷贝形式存在。PCR对苹果基因组DNA进行扩增后显示,MxIrt1基因至少含有一个内含子,长78bp。Northern杂交对MxIrt1基因在小金海棠及山定子中时空表达模式进行分析:MxIrt1基因在小金海棠部分器官中得以转录,但转录水平存在差异,嫩叶中表达水平偏低,花瓣中没有该基因的表达。
论文目录:
缩略词
第一章 文献综述
1．果树离体再生及转基因
1．1 果树离体再生
1．2 果树转基因研究
1．3 高效离体再生及转化系统的影响因素
2．缺铁胁迫下植物的吸铁机制及相关基因
2．1 机制Ⅰ植物吸铁机制及相关基因
2．2 机制Ⅱ植物吸铁机制及相关基因
2．3 可能的机制Ⅲ系统及相关基因
2．4 MxIrt1基因
3．研究目的和意义
第二章 苹果离体叶片再生、转化体系建立与优化
1．试验材料
2．试验方法
3．结果与分析
3．1 苹果离体叶片再生的生物学观察
3．2 激素组合对苹果离体叶片再生的影响
3．3 组培苗继代培养天数对苹果离体叶片再生的影响
3．4 暗培养天数对苹果离体叶片再生的影响
3．5 叶片极性对苹果离体叶片再生影响
3．6 再生植株生根统计
3．7 抗生素敏感性试验
3．8 农杆菌对转化效率影响试验
第三章 MxIrt1基因功能的初步研究
1．实验材料
2．常用培养基和溶液的配制
3．基本实验方法
4．结果与分析
4．1 植物表达载体的构建
4．2 农杆菌转化烟草
4．3 农杆菌转化苹果
4．5 MxIrt1基因的原核表达
4．6 MxIrt1基因的表达分析
第四章 讨论
1．苹果的遗传转化
1．1 影响叶片再生的因素
1．2 转基因植株筛选
2．MxIrt1基因研究
2．1 MxIrt1基因与GFP融合表达
2．2 MxIrt1基因功能
2．3 MxIrt1基因的原核表达
3．ZIP基因家族研究
第五章 结论
参考文献
致谢
个人简历
发布时间: 2005-07-22
参考文献
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