PPARγ2内源性配体对成骨细胞及骨髓细胞骨代谢相关基因表达的影响

论文摘要

骨组织代谢活跃,通过破骨细胞吸收旧骨和成骨细胞形成新骨这两个既相互偶联又相互制约的骨转换过程,不断进行骨重建以对自身进行新陈代谢。增龄时破骨细胞和成骨细胞发生数量与功能的改变,从而打破骨平衡状态,导致增龄相关的骨量减少及骨质疏松症。现已明确成骨细胞、破骨细胞及脂肪细胞均来源于骨髓细胞,随增龄骨髓细胞成骨分化可塑性下降,向脂肪细胞分化潜能增加,此过程与调节脂肪分化的PPARγ2基因表达增加有关,提示此基因可能直接参与了骨代谢过程。高表达PPARγ2的原因推测与增龄使其内源配体产生增加和其它转录因子对其抑制作用减弱有关。随增龄机体内许多PPARγ2天然配体水平增高,如多不饱和脂肪酸、氧化低密度脂蛋白等,它们是否参与了增龄相关的骨质疏松症的发生,目前相关报道较少。本实验拟观察不同浓度Ox-LDL、15d-PGJ2、亚油酸、LTB4干预后,成骨细胞及骨髓细胞PPARγ2及骨代谢相关基因RANKL、ALP、OPG、RANK、TRAP mRNA表达水平的变化,为进一步探讨增龄相关的骨质疏松症的发生机制提供新思路。一、PPARγ2内源性配体对成骨细胞骨代谢相关基因表达的影响目的:观察不同浓度PPARγ2内源性配体Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4以及共轭亚油酸（c9,t11-CLA和t10,c12-CLA）干预后,大鼠成骨细胞PPARγ2及RANKL、ALP、OPG mRNA表达水平的变化,探讨以上四种PPARγ2内源性配体对骨代谢的影响。方法:在体外培养的大鼠成骨细胞中分别加入不同浓度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4、c9,t11-CLA及t10,c12-CLA干预24小时,采用半定量RT-PCR检测成骨细胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG mRNA表达水平,分别比较上述四种PPARγ2内源性活化配体对骨代谢相关基因表达的影响。结果:（1）不同浓度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4均呈剂量依赖性下调成骨细胞RANKL、ALP、OPG mRNA的表达水平,同时呈剂量依赖性上调PPARγ2 mRNA的表达水平,组间比较差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;（2）不同浓度c9,t11-CLA呈剂量依赖性上调成骨细胞RANKL和OPG mRNA的表达水平,组间比较差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,且呈非剂量依赖性上调ALP mRNA的表达,但干预组PPARγ2 mRNA的表达水平与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。不同浓度t10,c12-CLA呈剂量依赖性上调成骨细胞RANKL和OPG mRNA的表达水平,组间比较差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;且呈非剂量依赖性上调ALP mRNA的表达,同时下调PPARγ2 mRNA的表达,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论:PPARγ2内源性活化配体Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4可能通过激活PPARγ2转录活性抑制成骨细胞成骨标记物基因的表达,从而参与增龄相关的骨质疏松症的发病过程,而c9,t11-CLA及t10,c12-CLA可能通过促进成骨基因表达有利于骨形成,在骨代谢中发挥正调控作用。二、PPARγ2内源性配体对大鼠骨髓细胞骨代谢相关基因表达的影响目的:因骨髓细胞中含有成骨细胞及破骨细胞的前体细胞,故观察不同浓度PPARγ2内源性配体Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4以及共轭亚油酸（c9,t11-CLA和t10,c12-CLA）干预后,大鼠骨髓细胞PPARγ2及RANKL、ALP、OPG、RANK、TRAP mRNA表达水平的变化,探讨以上四种PPARγ2内源性活化配体在骨代谢中的作用。方法:体外培养大鼠骨髓细胞,分别加入不同浓度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4、c9,t11-CLA及t10,c12-CLA干预24小时,采用半定量RT-PCR检测骨髓细胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG、RANK及TRAP mRNA表达水平,分别比较上述四种PPARγ2内源性配体对骨代谢相关基因mRNA表达的影响。结果:（1）不同浓度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4均呈剂量依赖性下调骨髓细胞RANKL、ALP、OPG mRNA的表达水平,同时呈剂量依赖性上调PPARγ2、RANK、TRAP mRNA的表达水平,组间比较差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;（2）不同浓度c9,t11-CLA呈剂量依赖性下调骨髓细胞RANK、TRAP mRNA的表达水平,组间比较差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,但干预组RANKL、ALP、OPG及PPARγ2 mRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。不同浓度t10,c12-CLA呈剂量依赖性上调骨髓细胞RANKL、OPG mRNA的表达水平,同时呈剂量依赖性下调RANK、TRAP及PPARγ2 mRNA的表达,组间比较差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,但干预组ALP mRNA的表达与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:PPARγ2内源性活化配体Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4可能通过激活PPARγ2转录活性抑制骨髓细胞成骨标记物基因的表达,促进破骨细胞标记物基因的表达,从而参与增龄相关的骨质疏松的发病过程,而c9,t11-CLA及t10,c12-CLA可能通过促进骨髓细胞成骨基因表达或抑制破骨细胞基因表达而促进骨形成,在骨代谢中发挥正调控作用。结论:1 PPARγ2内源性活化配体Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4可能通过激活PPARγ2转录活性下调成骨细胞RANKL、OPG、ALP mRNA表达,上调PPARγ2表达,抑制成骨过程;同时内源性配体激活PPARγ2可下调骨髓细胞RANKL、OPG、ALP mRNA的表达,上调其RANK、TRAP及PPARγ2 mRNA的表达,通过抑制成骨细胞分化,促进破骨细胞分化,从而参与增龄相关的骨质疏松的发病过程;2共轭亚油酸两种不同的结构形式c9,t11-CLA及t10,c12-CLA均促进成骨细胞及骨髓细胞成骨标记物基因的表达,抑制骨髓细胞破骨细胞标记物基因的表达,可能有利于骨形成,其机制尚未明确。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 PPARγ2 内源性配体对成骨细胞 骨代谢相关基因表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 附表
• 第二部分 PPARγ2 内源性配体对骨髓细胞 骨代谢相关基因表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 附表
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 缩略语
• 个人简历
• 致谢