论文摘要
膀胱肿瘤是泌尿生殖系统最常见的肿瘤,占男性肿瘤的6%,病因尚不完全清楚,但与环境、吸烟、及遗传因素有关,其中表浅性肿瘤占绝大部分。目前膀胱肿瘤的治疗手段仍以手术、化疗、放疗及免疫辅助治疗为主,术后给予膀胱内灌药是预防肿瘤复发的重要手段,然而进行化疗后,仍有45%-70%的复发率。术后较高复发率产生的原因,除膀胱肿瘤细胞自身所特有的生物学特性外,其主要原因是膀胱肿瘤细胞多药耐药（Multi-drug resistance,MDR）的产生。许多研究已证实环孢霉素A （Cyclosporine A,CsA）能逆转肿瘤细胞的多药耐药性,但CsA是一种强的免疫抑制剂,可使本来免疫力低下的肿瘤病人抵抗力进一步降低,导致重度感染,且其严重的肾脏损害影响了临床的应用,现在多采用与其他逆转剂联合,降低药物浓度以减少其副作用,而中药具有成本低、组织毒性小、安全范围大、广谱性强、作用靶点多的优势,已成为肿瘤逆转剂研究的热点,近年,已有研究证实苦参碱（Matrine,MAT）具有肿瘤逆转作用,因此,本研究采用CsA和中药MAT联合逆转膀胱肿瘤的耐药性。第一部分膀胱肿瘤T24/ADM耐药细胞的耐药性检测目的:复苏膀胱肿瘤T24/ADM细胞并检测其耐药性方法:将本导师组冻存的膀胱肿瘤T24细胞与膀胱肿瘤T24/ADM细胞进行复苏,复苏成功后加入阿霉素（ADM）培养,倒置显微镜下观察细胞形态变化及生长情况,MTT法检测细胞对药物的耐受性,流式细胞术检测P-gp的表达情况。结果:T24/ADM耐药细胞在形态上比T24细胞略大,核浆比例失调。加入ADM后,同浓度ADM作用下T24/ADM比T24细胞存活多,组间差异具显著性,P<0.01。T24/ADM细胞P-gp表达显著增高,T24表达不明显,差异具有显著性,P<0.01。结论:本导师组建立膀胱肿瘤T24/ADM耐药细胞保持着其耐药性。第二部分环孢霉素A（CsA）联合苦参碱（MAT）对膀胱肿瘤T24/ADM细胞耐药性的逆转及P-糖蛋白表达的影响目的:探讨CsA与MAT单独及联合应用对膀胱肿瘤T24/ADM细胞耐药性的逆转作用及P-gp表达的影响。方法:MTT法检测CsA与MAT单独及联合应用对T24/ADM细胞耐药性的逆转效应,流式细胞术检测耐药细胞P-gp的表达。结果:非细胞毒性剂量的CsA和MAT均能显著降低ADM对T24/ADM的IC50（p<0.01）,且当二者联合应用时,逆转效果明显好于二者单独应用（p<0.01）,逆转倍数大于二者之和。T24/ADM+CsA组与T24/ADM组相比,T24/ADM细胞的P-gp表达率差异无统计学意义（P>0.05）,T24/ADM+MAT组与T24/ADM组相比,T24/ADM细胞P-gp表达率明显降低（P<0.01）,当非细胞毒性剂量的两药联合应用后,对T24/ADM细胞P-gp的表达有显著的抑制作用（P<0.01）。结论:CsA与MAT均可逆转T24/ADM细胞的耐药性,且当两者联合应用时,呈协同效应。