阴道毛滴虫Tvmar1基因多态性与相关因素研究及Fd基因测序

论文摘要

背景和目的阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis,Tv）是一种寄生于人体泌尿生殖道的带鞭毛的寄生原虫。它可以引起阴道毛滴虫病（trichomoniasis）,还会增加如艾滋病和乙型肝炎等性传播疾病（sexually transmitted disease,STD）感染的机会。据世界卫生组织统计,全世界每年阴道毛滴虫感染者超过1.7亿。该虫对人体危害极大,而且流行广泛。人型支原体（Mycoplasma hominis,Mh）也是一种寄生于人体泌尿生殖道的病原体,是已知能独立生存的最小的微生物。它与阴道毛滴虫可引起类似的并发症:不育症、自发性流产、低出生体重儿等。国外学者对于它们之间的联系报道较早,国内有关资料较少,本研究通过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测手段,对阴道毛滴虫进行人型支原体检测,了解河南地区阴道毛滴虫与人型支原体的共生情况,并为临床治疗提供理论依据。本研究利用移动遗传因子（mobile genetic element,MGE）—PCR技术分析来自河南5个城市（郑州、安阳、洛阳、新乡、开封）的30个阴道毛滴虫样本的遗传多态性,明确它们之间的亲缘关系,并根据我们获得的阴道毛滴虫的相关资料:虫株的地理来源、人型支原体的寄生及滴虫病患者的临床症状和体征（分3度:轻度、中度、重度）,分析这些相关因素与阴道毛滴虫遗传多态性的联系,为我省开展阴道毛滴虫分子流行病学研究提供有价值的分子数据。作为最原始的真核生物,阴道毛滴虫缺乏线粒体,其特有的双层膜结构氢化酶体是虫体的主要代谢器官。而铁氧还蛋白（ferredoxin,Fd）作为氢化酶体代谢过程中重要的电子传递介体,在药物的激活中起关键作用。近年来,由于阴道毛滴虫耐药株的产生,许多学者开始关注Fd。本研究用PCR扩增出Fd基因,选取部分阴道毛滴虫的Fd基因直接测序,探讨阴道毛滴虫和人型支原体的共生以及地理来源的不同是否影响Fd基因,为临床治疗提供依据。材料与方法研究所用阴道毛滴虫虫株均由郑州大学附属医院的妇产科或检验科提供,且全部采集自女性患者。并详细记录每个病人的临床资料。本研究选取30个阴道毛滴虫样本,培养至对数生长期,用酚—氯仿法提取基因组DNA,并测定DNA的纯度和浓度。利用MGE—PCR技术,分析30个阴道毛滴虫样本Tvmar1基因的长度和位置的多态性,利用邻位相连法（neighbour-joining,NJ）,并借助MEGA3.1分析软件,以Tvmar1基因的位置变化为基础构建30株阴道毛滴虫的聚类树状图。用PCR技术对共生于阴道毛滴虫中人型支原体进行鉴定和Fd基因的扩增。选取部分阴道毛滴虫包括人型支原体和阴道毛滴虫共生的阳性株和阴性株及来自5个不同城市的虫株,将它们的Fd基因送到生物公司直接测序。结果1.阴道毛滴虫体内的人型支原体的PCR检测结果显示,30株阴道毛滴虫虫株中有25株扩增出DNA片段长度为334bp的特异产物,可判定为阳性,5株未能扩出目的基因,判定为阴性。阳性率为83.33%。2.利用MGE—PCR方法研究阴道毛滴虫虫株间的Tvmar1基因遗传多态性,结果显示,阴道毛滴虫种间的遗传差异明显,遗传距离在0到100%间均有分布(平均遗传距离为69.11%,平均遗传相似系数为30.89%。根据遗传距离构建的树状聚类图,发现有5个组的虫株间（[Tv12、Tv29];[Tv18、Tv20];[Tv14、Tv26];[Tv10、Tv25];[Tv15、Tv21]）遗传关系最为密切,遗传距离为0。3.阴道毛滴虫Fd基因的扩增结果显示,30个虫株均可扩增出DNA片段长度为300bp的特异产物。测序结果应用Clustalx软件比对,发现10株阴道毛滴虫的Fd基因序列完全相同,但与GenBank中的Fd基因序列（M33717）进行比较分析,发现在第200位多出ctg3个碱基,多编码1个亮氨酸,但并未导致读码框架改变。基因的同源性为99%。未发现地理来源和有无人型支原体共生对河南地区阴道毛滴虫Fd基因产生影响。结论1.河南地区阴道毛滴虫与人型支原体共生的现象普遍,阳性率为83.33%。2.30株阴道毛滴虫间的Tvmar1基因多态性可能与地理来源、有无人型支原体共生无关,而与临床表现程度有关。3.发现一新型Fd基因,与GenBank中的Fd基因比较,同源性为99%。未发现地理来源和有无人型支原体共生对河南地区阴道毛滴虫Fd基因产生影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 正文部分 阴道毛滴虫Tvmar1基因多态性与相关因素研究及Fd基因测序
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 综述 分子标记技术在阴道毛滴虫遗传学研究中的应用
• 参考文献
• 缩略词
• 致谢