鹿茸多肽的提取分离及其促进成骨细胞增殖作用的研究

论文摘要

鹿茸系鹿科动物梅花鹿（Cervus Nippon Temminck）或马鹿（Cervus elaphus Linnaeus）的雄鹿未骨化密生绒毛的幼角。中医主要用其治疗虚劳赢瘦、腰膝酸痛、心悸耳鸣、阳痰滑精、子宫虚冷、崩漏带下等症。鹿茸中含有多种生物活性物质能够促进机体的生长发育和新陈代谢,增强机体的免疫功能,对神经系统、心血管系统有良好的调节作用,有助于恢复和保持机体健康。本文采用水溶液提取法从新鲜梅花鹿鹿茸中提取出鹿茸多肽,然后经Sephadex-G-25葡聚糖凝胶层析和制备型高效液相色谱柱分离纯化,得到一系列分子量小于800u的小肽。采用MTT法检测鹿茸多肽对人成骨肉瘤细胞（OS-732）细胞的增殖活性的影响。结果表明鹿茸多肽能明显促进OS-732细胞的增殖。改良Gomori钙-钴法显示碱性磷酸酶,结果显示鹿茸多肽促进OS-732细胞增殖的同时,碱性磷酸酶的表达也明显提高。同时采用流式细胞仪检测鹿茸多肽作用OS-732细胞后的细胞周期变化,结果表明鹿茸多肽作用后OS-732细胞其S期所占的百分比明显高于对照组,说明鹿茸多肽对OS-732细胞有非常明显的增殖促进作用。本研究为开发鹿茸治疗骨质疏松症药物的研究提供了实验依据。

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内容提要

前言

一、鹿茸的药理活性

1、心血管系统

2、神经组织

3、免疫系统

4、对遗传的作用

5、骨骼系统

6、抗氧化作用

7、促皮肤组织愈合、抗炎作用

8、性功能的影响

9、不良反应

二、鹿茸的化学成分

1、氨基酸类

2、蛋白质多肽类物质

3、脂类

4、糖类

5、甾体类化合物

6、无机盐及其它类

三、鹿茸与骨细胞代谢、骨质疏松的关系

1、骨细胞

2、骨质疏松

实验材料与仪器

一、鹿茸

二、主要试剂

三、主要实验仪器

实验方法

一、鹿茸多肽的制备

1、鹿茸多肽的提取

2、鹿茸多肽的Sephadex G-25 层析

3、鹿茸多肽的制备型HPLC纯化

二、鹿茸多肽的鉴定

1、鹿茸多肽的定性检测采用双缩脲试剂检测

2、鹿茸多肽的蛋白含量测定采用Folin－酚法检测

3、鹿茸多肽的纯度检测采用HPLC法

4、鹿茸多肽的分子量鉴定采用电喷雾质谱法

三、鹿茸多肽的活性检测

1、细胞培养

2、四唑盐比色试验（MTT试验）

3、改良Gomori钙-钴法显示碱性磷酸酶

4、流式细胞仪检测细胞周期

结果和讨论

一、鹿茸多肽的制备、分离纯化

1、鹿茸总多肽的提取

2、鹿茸多肽B（VAP-B）的纯化

二、鹿茸多肽的检测、鉴定

1、鹿茸多肽的双缩脲反应

2、Folin－酚测定蛋白质浓度

3、鹿茸多肽的含量检测采用HPLC法

4、相对分子量采用电喷雾质谱法检测

三、鹿茸多肽的活性检测

1、鹿茸多肽对人成骨肉瘤细胞OS-732 增殖的影响

2、鹿茸多肽对碱性磷酸酶的影响

3、流式细胞仪分析细胞周期

参考文献

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