论文摘要
第一章人胚胎干细胞(hESCs)向胰岛素分泌细胞诱导分化的研究目的:体外模拟胰腺的体内发育过程,通过添加因子的方式诱导hESCs得到胰岛素分泌细胞。方法:HESCs在人源性饲养层培养体系下传代培养,在传代第5天开始诱导实验,分四个阶段。第一阶段,hESCs在高浓度的ActivinA(100ng/ml)和低浓度血清条件下作用5天向限定性内胚层(DE)细胞特化;第二阶段,先由视黄酸(10-5M)处理24小时以启动胰腺命运特化,第三阶段,加入1%ITS和Fibronectin(5ug/ml)以及Exendin-4(50ng/ml)的作用7天,促进胰腺前体细胞的增殖和分化;第四阶段,将细胞消化后悬浮培养,加入1%N2,2%B27,烟碱(10-2M),Exendin-4(50ng/ml)以及Betacellulin(20ng/ml)作用7天使细胞进一步分化成熟得到胰岛样细胞团。结果:诱导过程中能检测到胰腺发育关键转录因子(Sox17,Pdx1,Ngn3,Beta2)的表达,第5天有80%左右的Sox17阳性细胞,第13天有17%左右的Pdx1阳性细胞,第20天有4%左右的胰岛素(Insulin)阳性细胞。诱导终末团块表达胰岛细胞标记蛋白Insulin和胰高血糖素(Glucagon);胰腺细胞的特征基因Insulin,Glucagon,生长抑素(Somastatin,SS),淀粉酶(Amylase);分泌功能相关的标记基因PC2,PC1/3,SUR1,GCK;胰岛素释放实验显示,终末细胞团对不同糖浓度(5.5mM和25mM)具有反应性,在高浓度条件下的胰岛素释放量是低浓度条件下的1.5—4倍。电镜检测到胞浆中存在大量分泌性颗粒。结论:四阶段诱导法诱导所得终末细胞团具备胰岛细胞的基本特征。第二章人孤雌胚胎干细胞(phESCs)和正常hESCs向胰岛素分泌细胞诱导分化的比较研究目的:探究phESCs能否向胰岛素分泌细胞分化以及它与正常hESCs在分化过程中是否存在差异。方法:以正常来源的hESCs(chHES8),孤雌来源的hESCs(chHES32,chHES69)共三株细胞为材料,在分化的d0,d5,d13,d20收集细胞,通过RT-PCR,realtime PCR以及免疫荧光染色来比较它们的胰腺发育标记蛋白(Sox17,Pdx1,Insulin)阳性率,胰腺发育标记基因和印记基因的表达水平,以及增殖能力上的差异。结果:在诱导过程中,phESCs来源的细胞能表达胰腺发育各个阶段的标记基因和蛋白,终末细胞团对不同葡萄糖浓度刺激呈现反应性。与正常hESCs来源的细胞相比,phESCs来源的细胞Sox17的基因和蛋白表达量与它的表达水平相近;phESCs来源的细胞Insulin蛋白表达水平是它的1/2左右;三株细胞的增殖能力没有统计学差异。大部分印记基因呈现典型的父源性或母源性表达,只有IGF2/H19这对印记基因在2株phESCs的体外分化过程中出现了逐渐增强的表达,与正常hESCs表达水平接近。结论:phESCs具有分化为胰岛素分泌细胞的能力,正常hESCs较phESCs更容易向胰岛素分泌细胞诱导分化。
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- [1].干细胞诱导分化为视网膜色素上皮细胞的途径探讨[J]. 国际眼科杂志 2020(10)
- [2].干细胞诱导分化为肝样细胞检测技术的研究进展[J]. 中国医药指南 2016(07)
- [3].急性前髓细胞性白血病细胞诱导分化实验的研究进展[J]. 现代生物医学进展 2009(15)
- [4].离子维C对干细胞诱导分化的作用及对血液红细胞功能的影响[J]. 中国输血杂志 2016(12)
- [5].3D细胞培养体系在促进干细胞向肝细胞诱导分化研究中的作用进展(英文)[J]. 外科研究与新技术 2015(02)
- [6].脂肪干细胞向神经细胞诱导分化研究进展[J]. 武汉大学学报(医学版) 2012(02)
- [7].胚胎干细胞/诱导多能干细胞向肝细胞诱导分化的研究进展[J]. 医学综述 2016(09)
- [8].干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究现状[J]. 现代生物医学进展 2009(11)
- [9].骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的研究进展[J]. 医学综述 2009(24)
- [10].干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究与进展[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2008(25)
- [11].中药对干细胞诱导分化影响的研究进展[J]. 时珍国医国药 2017(11)
- [12].哺乳动物多能干细胞向生殖细胞分化的研究进展[J]. 农业生物技术学报 2020(11)
- [13].3T3-L1脂肪细胞诱导分化的研究进展[J]. 中国医学科学院学报 2017(05)
- [14].干细胞诱导分化为甲状腺细胞用于临床的可能性[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2011(49)
- [15].MCHR1基因沉默对3T3-L1细胞诱导分化的影响[J]. 现代预防医学 2015(15)
- [16].小分子化合物在干细胞诱导分化为视网膜色素上皮细胞中的应用[J]. 眼科新进展 2016(07)
- [17].我刊常务副主编付小兵院士第4次入选“中国高被引学者榜单”[J]. 感染、炎症、修复 2018(01)
- [18].VEGF转染对MSCs向神经细胞诱导分化的影响[J]. 中华神经外科疾病研究杂志 2010(04)
- [19].肝干细胞向成熟肝细胞诱导分化的体内外特点[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2008(08)
- [20].针对代次较多的3T3-L1细胞诱导分化法的改良[J]. 实验科学与技术 2016(04)
- [21].骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究进展[J]. 中国药理学与毒理学杂志 2012(03)
- [22].小鼠CD45~-/CD31~+肺侧群细胞诱导分化的研究[J]. 中国现代医学杂志 2017(06)
- [23].IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA表达的影响[J]. 长治医学院学报 2008(06)
- [24].胎牛视网膜干细胞向神经细胞诱导研究[J]. 畜牧兽医学报 2014(04)
- [25].干细胞向胆管上皮细胞诱导分化的研究进展[J]. 医学综述 2014(09)
- [26].骨髓基质细胞分离培养、体外向神经细胞诱导分化及其在中枢神经系统疾病中的研究进展[J]. 神经损伤与功能重建 2010(02)
- [27].干细胞诱导分化为产胰岛素细胞的研究进展[J]. 现代生物医学进展 2016(07)
- [28].干细胞向肝细胞诱导分化机制的研究进展[J]. 医学综述 2010(09)
- [29].NRSE/RE-1序列与小鼠胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的关系[J]. 中国医科大学学报 2009(06)
- [30].骨髓基质细胞诱导分化成骨方法及相关研究进展[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2009(01)
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