肉鸡HSP70和HSP90基因的遗传多态性及组织表达谱分析

论文摘要

本研究以温氏公司饲养的主要肉鸡品种快大青麻、矮D、土2、灵山土鸡、乌骨鸡为研究对象,研究热应激蛋白HSP70和HSP90基因的遗传多样性,比较不同群体内基因型的分布规律,并分析了其与肉鸡屠宰性状之间的相关性；同时采用实时荧光定量（Real-time）PCR技术分析了HSP70和HSP90基因在肉鸡13中组织中的相对表达水平。取得的结果如下：1.鸡HSP70基因的不同基因型及其与屠宰性状的关系利用AS-PCR的方法检测出肉鸡HSP70基因有三种基因型GG. AA和AG。对该位点的不同基因型与肉鸡的屠宰性状进行最小二乘分析,结果表明：快大青麻公鸡中,AG型个体的胸肌重、胸肌率显著高于GG型个体；矮D公鸡中,该位点的宰前活重、胴体重、半净膛重、全净膛重、屠宰率、胸肌率、胸肌重有显著差异；矮D母鸡中,GG型个体的半净膛重、腿肌重显著高于AG型个体,AA型个体的腹脂率显著高于GG型；土2母鸡中,AA型个体的屠宰率显著高于GG型和AG型个体；乌骨鸡公鸡中,AG型个体的胸肌率显著高于GG型个体；乌骨鸡母鸡中, GG型个体的屠宰率显著高于AA型个体；灵山土鸡公鸡中,AG型个体的胴体重、半净膛重、全净膛重、全净膛率、腿肌重显著高于GG型个体；灵山土鸡母鸡中,GG基因型的屠宰率显著低于AG型个体。2.鸡HSP90基因的不同基因型及其与屠宰性状的关系利用PCR-RFLP.SB-ASA和DNA测序相结合的方法发现HSP90基因的外显子2上处存在T→C非同义突变,由苯丙氨酸（Phe, F）突变为丝氨酸（Ser, S）,经检测存在两种基因型TT和TC型。对该位点的不同基因型与肉鸡的屠宰性状进行最小二乘分析,结果表明：矮D公鸡中,TT型个体的胸肌率显著高于TC型个体；灵山土鸡公鸡中,TC型个体的胸肌重显著高于TT型个体；在其它品种中,不同基因型与宰前活重、胴体重、半净膛重、全净膛重、屠宰率、半净膛率、全净膛率、腿肌重、胸肌重、腹脂重、腿肌率、胸肌率、腹脂率没有显著相关。3.荧光定量法分析HSP70和HSP90基因的组织表达谱采用荧光定量PCR方法分析HSP70和HSP90基因在肉鸡的13种组织中的相对表达量,结果表明：HSP70和HSP90基因在这些组织中都有表达,但表达量有差异。HSP70基因在胰腺、腿肌、腹脂中表达量最高,其次是肾和骨骼肌,在心脏、肝脏、脾脏、小脑、下丘脑、垂体中表达相对较少,在肺脏和大脑中表达量最少。HSP90基因在心脏、小脑、垂体、腿肌、骨骼肌最高,在肝脏、胰腺、大脑、下丘脑、腹脂中的表达量较少,在脾脏、肺脏、肾脏中的表达量最少。

论文目录

• 目录
• 摘要
• ABSTRACT
• 文献综述
• 1 热应激与鸡生产性能
• 1.1 热应激
• 1.2 热应激对鸡生产性能的影响
• 2 热应激蛋白HSPs及其生物学功能
• 2.1 热应激蛋白HSPs
• 2.2 HSPs的生物学功能
• 2.2.1 分子伴侣
• 2.2.2 协同免疫作用
• 2.2.3 抗细胞凋亡
• 2.2.4 对细胞周期的调控作用
• 2.2.5 抗氧化作用
• 3 HSP70基因研究进展
• 3.1 HSP70家族的组成
• 3.2 HSP70的特性
• 3.3 HSP70的基因结构
• 3.4 HSP70基因的多态性研究
• 4 HSP90基因研究概况
• 4.1 HSP90家族的组成
• 4.2 HSP90基因的结构
• 4.3 HSP90基因的多态性研究
• 5. 动物的分子遗传标记概述
• 5.1 限制性片段长度多态性
• 5.2 随机扩增多态DNA
• 5.3 扩增片段长度多态性
• 5.4 单链构象多态性
• 5.5 单核苷酸多态性
• 6. 本实验研究的目的和意义
• 试验研究
• 试验一 肉鸡热应激基因HSP70的遗传多态性分析
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 实验动物
• 1.1.2 主要仪器
• 1.1.3 主要试剂
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 血液DNA的提取
• 1.2.2 DNA的纯度和浓度测定
• 1.2.3 引物的设计
• 1.2.4 PCR反应
• 1.3 数据分析
• 1.3.1 等位基因频率和等位基因型频率的计算
• 1.3.2 多态信息含量的计算
• 2. 结果和分析
• 2.1 运用SB-ASA检测个体的基因型
• 2.2 G1500A多态位点的基因频率和基因型频率
• 2.3 HSP70基因的遗传多态性分析
• 2.3.1 快大青麻鸡HSP70基因型与屠宰性状的关系
• 2.3.2 矮D肉鸡HSP70基因型与屠宰性状的关系
• 2.3.3 HSP70基因型与土2鸡的屠宰性状分析
• 2.3.4 HSP70基因型与乌骨鸡屠宰性状的关系
• 2.3.5 HSP70基因型与灵山土鸡屠宰性状的关系
• 3. 讨论
• 4. 本章小结
• 试验二 肉鸡热应激基因HSP90的遗传多态性分析
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 实验动物
• 1.1.2 主要仪器
• 1.1.3 主要试剂
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 血液DNA的提取
• 1.2.2 DNA的纯度和浓度测定
• 1.2.3 引物的设计
• 1.2.4 PCR反应
• 1.2.5 HSP90基因片段的多态位点确定
• 1.2.6 基因测序
• 1.2.7 SB-ASA法检测基因多态位点
• 1.3 数据分析
• 1.3.1 等位基因频率和等位基因型频率的计算
• 1.3.2 多态信息含量的计算
• 2. 结果与分析
• 2.1 鸡HSP90基因目的片段的扩增
• 2.2 HSP90的多态性检测
• 2.2.1 HSP90目的片段的酶切电泳
• 2.2.2 HSP90基因的多态位点测序结果
• 2.2.3 用SB-ASA法进行HSP90基因的多态性检测
• 2.3 HSP90基因多态位点的基因频率和基因型频率
• 2.4 HSP90基因的遗传多态性分析
• 2.4.1 HSP90基因型与快大青麻鸡的屠宰性状关联分析
• 2.4.2 HSP90基因型与矮D鸡的屠宰性状关联分析
• 2.4.3 HSP90基因型与土2鸡的屠宰性状关联分析
• 2.4.4 HSP90基因型与乌骨鸡的屠宰性状关联分析
• 2.4.5 HSP90基因型与灵山土鸡的屠宰性状关联分析
• 3. 讨论
• 4. 本章小结
• 试验三 HSP70和HSP90基因的组织表达谱分析
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1. 实验动物
• 1.1.2 实验试剂
• 1.1.3 实验仪器
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 组织RNA提取
• 1.2.2 反转录
• 1.2.3 引物设计和PCR扩增
• 1.2.4 荧光定量PCR
• 1.2.5 数据分析
• 2. 结果与分析
• 2.1 普通PCR检测结果
• 2.2 HSP70、HSP90和β-actin基因的荧光定量
• 2.3 组织表达谱
• 3. 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢