环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂眼部给药系统的研究

论文摘要

环孢素A（Cyclosporine A,CyA）是一个由11个氨基酸所构成的脂溶性环状多肽化合物,在眼科被有效地用于预防角膜移植时的排异反应,由于其强脂溶性,国内外的报道较多的是将CyA制成各种植物油、膏剂或胶原罩等用于眼局部给药。这些制剂普遍存在生物利用度低、患者顺应性差等缺点;而全身使用时,不良反应较严重,且由于血-眼房水屏障,吸收进入眼组织的药物浓度很低。本文以增加难溶性的环状大分子环孢素A的眼部生物利用度、减少毒副作用为主体思路,进行了一系列的研究。包括载环孢素A的固体脂质纳米粒、固体脂质纳米粒表面电荷的修饰,以及将纳米粒混悬于热敏型原位凝胶制成局部给药制剂。最后,对以上三种制剂与普通环孢素蓖麻油滴眼剂进行了家兔泪液中的消除动力学和角膜内药物浓度的比较。首先,实验制备了环孢素A固体脂质纳米粒。利用眼角膜细胞表面带负电的特性,用十八胺包裹纳米粒,使其表面荷正电,正负电荷相吸引而更易黏附于眼角膜,从而延长药物的作用时间。在本研究中,脂质纳米粒的材料为单硬脂酸甘油酯和山嵛酸甘油酯的混合脂相、以重蒸馏水作为水相,泊洛沙姆188作为表面活性剂,以及正电荷调节剂十八胺作为包衣材料,研究了不同处方和制备工艺参数对纳米粒的大小、稳定性和包封率的影响。在此基础上,进一步将纳米粒混悬于泊洛沙姆407的原位凝胶中,纳米粒的加入使聚合物溶液的胶凝温度普遍提高了11℃。然后对纳米粒和纳米粒-凝胶制剂的一些性质进行了考察,包括纳米粒的粒径大小、粘度、pH值、DSc、IR光谱和体外释放等。采用无膜溶出模型考查了凝胶溶蚀和纳米粒释放的特性。结果表明,纳米粒的释放受凝胶溶蚀的控制,表观上遵循零级动力学过程。家兔眼部四项实验,包括兔离体角膜和结膜的黏附滞留实验、泪液消除动力学实验、离体角膜透过和角膜药物残留实验。本研究具体考察了制剂在眼部的滞留能力。结果表明,带正电荷的纳米粒比带负电荷的纳米粒有更高的角膜结膜亲和性,在泪液消除中呈现更缓慢的消除趋势;载包衣纳米粒的凝胶制剂则表现出更好的眼部滞留性,与蓖麻油制剂相比,刺激性小,生物利用度高。角膜透过实验表明药物不易透过角膜,这和药物本身的理化性质有关,不同剂型影响不大;不同剂型的药物在角膜内的残留量不同,以带正电的纳米粒表现出更好的角膜残留。药物不易透过角膜,在角膜中残留量越多,对于CyA治疗角膜移植时的排异反应、发挥局部治疗作用越有利。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 一、环孢素A概述
• 二、环孢素A制剂的研究现状
• 三、固体脂质纳米粒（SLN）的研究进展
• 四、原位凝胶
• 五、眼部给药的特点
• 六、本论文的主要内容及技术难点
• 参考文献
• 第一章 环孢素A固体脂质纳米粒的制备
• 1 材料和仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 纳米粒的制备
• 2.1.1 混合脂质纳米粒的制备
• 2.1.2 十八胺包衣的固体脂质纳米粒的制备
• 2.2 纳米粒药物包封率的测定
• 2.3 纳米粒稳定性的考察
• 2.4.质量评价方法
• 2.4.1 外观和光学显微镜
• 2.4.2 可见分光光度法测定浊度
• 2.4.3 稳定常数Ke评价SLN混悬液的稳定性
• 2.5 处方单因素考察
• 2.5.1 复配脂质的筛选
• 2.5.2 表面活性剂的筛选
• 2.5.3 十八胺用量的影响
• 2.5.4 环孢素A含量对SLN粒子大小和稳定性的影响
• 2.5.5 正交设计优化最终处方
• 2.6 制备工艺单因素考察
• 2.6.1 制备温度的影响
• 2.6.2 超声时间的考察
• 2.6.3 pH对SLN稳定性的影响
• 3 结果与讨论
• 3.1 纳米粒稳定性的考察
• 3.2 质量评价方法
• 3.2.1 外观和光学显微镜
• 3.2.2 可见分光光度法测定浊度
• 3.3 处方单因素考察
• 3.3.1 混合脂质载体的筛选
• 3.3.2 表面活性剂的筛选
• 3.3.3 十八胺用量的影响
• 3.3.4 环孢素A含量对SLN粒子大小和稳定性的影响
• 3.3.5 优化处方筛选——多指标的正交实验设计
• 3.4 进一步优化——制备工艺单因素考察
• 3.4.1 制备温度的影响
• 3.4.2 超声时间的考察
• 3.4.3 pH对SLN稳定性的影响
• 4.本章小结
• 参考文献
• 第二章 环孢素A固体脂质纳米粒理化性质的考察
• 1.环孢素A含量分析方法的建立
• 1.1 仪器与试剂
• 1.2 方法与结果
• 1.2.1 标准溶液的配制
• 1.2.2 色谱条件的优化
• 1.2.3 方法的建立
• 2.微柱离心法测定环孢素A固体脂质纳米粒的包封率
• 2.1 材料与仪器
• 2.2 微柱离心条件的建立
• 2.2.1 Sephadex微型柱的制备
• 2.2.2 不同凝胶柱的选择
• 2.3 环孢素A固体脂质纳米粒包封率测定
• 3.环孢素A固体脂质纳米粒及其理化性质的考察
• 3.1 材料与仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 激光散射法测定SLN的粒径
• 3.2.2 电泳光散射法测定SLN的动电电位
• 3.2.3 SLN动力黏度的测定
• 3.2.4 SLN的pH值的测定
• 3.2.5 CyA-SLN体外释放试验
• 3.2.6 红外光谱的测定
• 3.2.7 DSC考察
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 粒径测定结果
• 3.3.2 ζ电势的测定
• 3.3.3 SLN动力黏度的测定
• 3.3.4 SLN混悬液的pH值
• 3.3.5 CyA-SLN体外释放规律
• 3.3.6 红外光谱结果
• 3.3.7 DSC结果
• 4 本章小结
• 参考文献
• 第三章 载纳米粒热敏型原位凝胶的研究
• 1.仪器和试药
• 2.实验方法
• 2.1 温度敏感型原位凝胶的制备
• 2.2 模拟泪液
• 2.3 胶凝温度的测定
• 2.4 原位凝胶中纳米粒的释放
• 2.4.1 凝胶溶蚀动力学
• 2.4.2 凝胶中纳米粒的释放
• 2.4.3 纳米粒中CyA的释放
• 3 结果与讨论
• 3.1 泊洛沙姆407溶液胶凝温度的考察
• 3.2 PEG修饰SLN的加入对胶凝温度的影响
• 3.3 凝胶溶蚀与药物释放
• 3.3.1 纳米粒中CyA的释放
• 3.3.2 振荡频率对凝胶溶蚀与纳米粒释放的影响
• 3.3.3 凝胶溶蚀与纳米粒释放的关系
• 4 本章小结
• 参考文献
• 第四章 制剂对家兔眼部作用的评价
• 1 体外实验方法评价修饰与未修饰载药SLN在家兔眼角膜的滞留能力
• 1.1 仪器、试剂与动物
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 制剂的标记
• 1.2.2 角膜和结膜的摘取
• 1.3 结果与讨论
• 2.四种制剂在家兔眼部泪液中代谢动力学考察
• 2.1 仪器、试剂与动物
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 制剂的制备
• 2.2.2 给药方案及样品的采集与预处理
• 2.2.3 分析方法的建立
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 隔室模型的判断
• 2.3.2 数据处理结果
• 3 离体兔角膜透过实验和角膜内药物残留量考察
• 3.1 仪器、试剂与动物
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 四种制剂的制备
• 3.2.2 实验装置
• 3.2.3 离体角膜的制备
• 3.2.4 接受液的配制
• 3.2.5 离体角膜透过实验
• 3.2.6 角膜中药物残留量的测定
• 3.2.7 数据处理
• 3.2.8 分析方法的建立
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 四种制剂中环孢素A的角膜透过
• 3.3.2 角膜内药物残留量的测定
• 4 在体刺激性评价
• 4.1 剂量的选择
• 4.2 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 5 本章小结
• 参考文献
• 全文结论
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表论文情况